恶性甲状腺肿瘤分子标志物的分析肿瘤学专业论文.docxVIP

博士研究生论文实验设计 博士研究生论文 实验设计 实验标本：手术切除的各种良、恶性甲状腺病变组织标本，在可能的情况下同 时获得病变旁或病变对侧的正常甲状腺组织及细针穿刺标本。 实验目的。探讨甲状腺肿瘤发生、发展的分子机制：探讨能鉴别甲状腺癌的特 异性肿瘤标志物。 第一部分 端粒酶与甲状腺肿瘤 一、 良、恶性甲状腺组织中端粒酶活性的定性及定量分析 目的l应用改良TRAP．PCR技术探讨端粒酶活性表达与甲状腺癌发生发展的关 系。 实验流程t 制各端粒酶提取物 I j 制备点混合物制备反应混合物 端占延伸 (300C，30min) J @4℃仃08ec，59。r岛27’3嘴刑 0 J 0 博士研究生论文二、原位杂交法检测甲状腺组织中端粒酶反转录酶(hTERT)的表 博士研究生论文 二、原位杂交法检测甲状腺组织中端粒酶反转录酶(hTERT)的表 达 目的t探讨原位检测hTERT表达能否提高端粒酶作为恶性甲状腺肿瘤标志物 的应用价值。 实验流程t 甲状腺冰冻组织切片 甲状腺石蜡包埋组织切片 探针进行原位杂交Y免疫组织化学染色 ●●●●◆ ，●●●◆ hTERT mRNA特异性 PCNA单克隆抗体进行 计数1000个细胞中hTERT或PCNA表达的阳性细胞数， 以阳性细胞的百分率分别表示组织hTERT表达强度及细胞增殖指数(PI) 』 ● 分析hTERT表达与端粒酶活性表达及PCNA表达的关系 ● 比较hTERT表达的原位检测与端粒酶活性检测鉴别良、 恶性甲状腺肿瘤的敏感性、特异性。 2 博士研究生论文第二部分乳头状甲状腺癌中ret基因重组突变的研究 博士研究生论文 第二部分乳头状甲状腺癌中ret基因重组突变的研究 目的；探讨ret基因重组突变作为乳头状甲状腺癌特异性标志物的意义。 方法l RT．多重．PCR，RT一鉴定-PCR。 实验流程t ● 多重．PCR及鉴定一PCR引物设计 ● RT．PCR： 从甲状腺组织中提取总RNA 上 多重一PCR筛查retlPTCs J 鉴定．PCR确定ret／PTC类型(ret／PTCl，2或3) ●纯化鉴定PCR产物 ·DNA自动测序仪直接测序 ●数据分析 第三部分综合部分 目的t探讨与甲状腺癌发生有关的多因素之间的相互作用、相互影响。 方法。分析比较端粒酶及ret重组突变在甲状腺肿瘤中的表达状况。 博士研究生论文恶性甲状腺肿瘤分子标志物的研究 博士研究生论文 恶性甲状腺肿瘤分子标志物的研究 天津医科大学总医院 (天津300052) 专 业 内分泌代谢病学 博士研究生 郑荣秀 导 师 方佩华教授 导师组成员 谭建主任医师 吕枚副教授 ：背景：甲状腺肿瘤是临床上颇为多见的疾病，在外科住院及门诊病人中约 占15％20％，其中大部分为良性肿瘤，只有5％为恶性一即各种甲状腺癌；但 临床上最具重要性的甲状腺肿瘤是甲状腺癌，其诊断和治疗对病人的生存和生 活质量影响极大。及时的诊断和治疗可使甲状腺癌病人的长期生存率达90％以 上，但当肿瘤已有侵犯或转移时则无特异而有效的治疗措旌(胡继康《现代 肿瘤外科学》)。 甲状腺细胞由滤泡上皮细胞及滤泡旁细胞(即C细胞)组成。大多数甲状 腺癌起源于滤泡上皮细胞，分为分化型及未分化型(即间变癌)；前者在形态 学上又分为乳头状癌及滤泡性癌。少数甲状腺癌起源于C细胞，即髓样癌，有 散发型及遗传型两种。临床上多见的为分化型甲状腺癌，尤其乳头状癌，约占 各种甲状腺癌的80％。 甲状腺癌的组织类型多样，生物学行为各异，恶性程度高低不一，且缺乏 特异性的诊断手段，因此临床上术前、术中诊断率低。虽然细针穿刺抽吸细胞 学检查(fine．needle aspiration cytology,FNAC)的应用可使甲状腺癌的术前诊 断率提高到80％左右，但仍有20％或以上的病人不能确诊，为此临床上常发生 良性甲状腺肿瘤患者接受了不必要的手术，而对一些甲状腺癌病人以良性肿瘤 手术，待术后病理诊断后再施以二次手术以扩大手术范围或行根治术，给病人 造成额外的痛苦，甚至贻误病情。因此探讨甲状腺肿瘤的发生、发展机制，确 定能鉴别出甲状腺癌并估计预后的特异性肿瘤标志物，建立可靠、可行的术前 检测手段，依此指导手术方案的制定，是改善甲状腺肿瘤患者临床治疗效果的 需要，也是本研究的宗旨。， · 最近的研究表明，端粒酶的激活可能是大多数恶性肿瘤发生、发展过程中 重要而必需的步骤；而ret基因重组突变与乳头状甲状腺癌有着独特的联系。 4 博士研究生论文为此，我们以良性甲状腺肿瘤及正常甲状腺组织为对照，研究了这两种分子改 博士研究生论文 为此，我们以良性甲状腺肿瘤及正常甲状腺组织为对照，研究了这两种分子改 变与甲状腺癌发生、发展之间的特定联系，分析它们作为特异性肿瘤标志物在 临床甲状腺肿瘤鉴别诊断、估计预后及指导治疗