trem2在mptp所致帕金森病模型中的作用及机制药理学专业论文.docxVIP

CONTENTSChineseAbstract CONTENTS ChineseAbstract ．1 En91ishAbstract ．．4 Abbreviations ． ．7 Introduction ． 9 Materials ． 13 Methods ．．17 Results ．28 Discussion ．．33 Conclusion ．．37 Figures 38 Ref．erences ．．54 Acknowledgement ．．58 Publications ．59 万方数据 山东大学硕士学位论文TREM2在MPTP所致帕金森病模型中的作用及机制 山东大学硕士学位论文 TREM2在MPTP所致帕金森病模型中的作用及机制 硕士研究生：任曼茹 学号：201313694 指导教师：张岫美教授 娄海燕副教授 学院名称： 医学院 专业名称： 药理学 中文摘要 【研究背景】 帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种中老年人常见的中枢神经系统退 行性疾病，严重危害人类健康。PD典型病理特征为中脑黑质致密体部位多巴胺 能神经元细胞选择性丢失，其投射于纹状体内的神经纤维退行性变性。PD的病 因及发病机制尚不完全清楚。现有研究表明，以小胶质细胞浸润和炎症因子高表 达为主要特征的炎症反应参与了PD的发生发展过程。 小胶质细胞是存在于中枢神经系统内的固有免疫细胞，在正常成熟脑组织中 处于静息状态，发挥免疫监视作用。内环境的改变能够引起小胶质细胞激活，发 挥吞噬异物、释放神经营养因子、产生氧自由基和促炎因子等作用。此外，小胶 质细胞能够在疾病过程中被长期活化，形成反应性小胶质细胞循环，导致炎症反 应放大。 髓样细胞触发受体(Triggering receptor expressed on myeloid cells，TREMs) 是一类新型免疫球蛋白超家族，表达于髓细胞不同亚群表面。在中枢神经系统， TREM2主要表达于小胶质细胞。已有研究证明TI迮M2在多种神经系统疾病的 发生发展过程中发挥重要作用，包括多发性硬化、缺血性脑卒中及阿尔兹海默症 等。遗传学研究结果显示，TI也M2基因突变与帕金森病具有一定程度的相关性。 本研究通过MPTP诱导小鼠PD急性炎症模型，探讨TI迮M2在PD中的作用， 并从调控免疫炎症的角度阐明其作用机制，为PD的防治提供一个新思路。 【研究目的】 阐明TI也M2对MPTP所致PD模型的作用并探讨其作用机制。 万方数据 山东大学硕士学位论文【研究方法】 山东大学硕士学位论文 【研究方法】 体外实验： 1．体外培养BV2细胞，以腺病毒为载体介导TREM2过表达，并给予LPS刺激， 24 h后用reaItime ImPCR检测TNF．O【、IL一1B、iNOS、COX．2 mI斟A水平的 变化。 2．体外培养BV2细胞，以腺病毒为载体介导TREM2过表达，并给予LPS刺激， 24 h后用Westem blot方法检测iNOS和COX．2蛋白水平的变化。 体内实验： 1．C57BL／6小鼠腹腔注射MPTP构建PD急性炎症模型，于造模后1 d、2 d、3 d、5 d、7 d、10 d取脑组织，用W色stem blot检测TH和TREM2的蛋白表达 水平，用realtime RT-PCR检测TREM2 mRNA水平的变化。 2．造模3 d后取脑组织进行冰冻切片，用免疫荧光染色方法进行TREM2和 CDl lb共定位双染。 3．通过脑立体定位注射技术，向C57BL／6小鼠纹状体定位注射TREM2过表达 病毒，两周后腹腔注射MPTP构建PD模型，并于造模7 d后取脑组织，用 免疫组化、免疫荧光、Westem blot方法检测TH表达的改变，HPLC法检测 纹状体内DA及其代谢产物HVA、DOPAC含量的改变。 4．通过脑立体定位注射技术，向C57BL／6小鼠纹状体定位注射TI也M2过表达 病毒，两周后腹腔注射MPTP构建PD模型，造模3 d后取脑组织做冰冻切 片，用免疫荧光方法分别进行CDl 1b和GF’AP染色，观察小胶质细胞和星形 胶质细胞数量及形态改变。 5．通过脑立体定位注射技术，向C57BL／6小鼠纹状体定位注射TI冱M2过表达 病毒，两周后腹腔注射MPTP构建PD模型，取造模7 d后脑组织，用realtime ImPCR检测TNF．Cc、IL．1B、iNOS、COx．2 mRNA水平的改变，并通过westem blot检狈0 iNOS、COX．2、TLIⅥ、TRAF6、p—p65、p65、p-JNK、JNK、p—p38、 p38蛋白水平的改变。 【实验结果】 万方数据 山东大学硕士学位论文1．MPTP 山东大学硕士学位论文 1．MPTP PD模型小鼠中TREM2表达变化规律