靶向cd138嵌合抗原受体的表达优化及其对多发性骨髓瘤rpmi8226细胞杀伤影响内科学血液病学专业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文1．4含anti—CDl38一CAR慢病毒载体的包装及浓缩 解放军医学院硕士学位论文 1．4含anti—CDl38一CAR慢病毒载体的包装及浓缩 一(24) 1．5 Anti—CDl38一CAR—T细胞的制备及培养 (25) 1．6流式细胞术测定anti—CDl38一CAR的表达 ．．(25) 2．结果与统计学分析 ～(26) 第三部分靶向CDl38嵌合抗原受体的表达优化对I洲18226细胞的杀伤影响 ．．(：18) 1．材料与方法 (28) 1．1材料与试剂 ．．(28) 1．2主要仪器设备 一(28) 1．3细胞系的选择及RPMl8226细胞的培养方法 一(28) 1．4 Anti—CDl38一CAR—T细胞与RPMl8226细胞共培养及CCK一8法检测杀伤 活性 (29) 2．结果与统计学分析 ．．(30) 讨论 一(33) 结论 一(40) 文献综述 ．(41) 中英文缩略词汇对照 ．(57) 攻读学位期间发表文章情况 (59) 致谢 ．(61) 万方数据 解放军医学院硕士学位论文靶向CDl 解放军医学院硕士学位论文 靶向CDl 38嵌合抗原受体的表达优化及其对多发性骨髓瘤 R嗍l 8226细胞杀伤影响 中文摘要 研究背景：多发性骨髓瘤(Mult iple Myeloma，姗)是第二常见的血液系统 恶性肿瘤，克隆性浆细胞在骨髓及髓外病灶积聚，并最终引起肾衰竭，免疫抑制 伴反复感染，贫血以及骨质损伤。尽管Ⅲ的治疗有了长足的进步，但至今仍是 不可治愈的恶性疾病，绝大多数的患者最终会复发或进展。嵌合抗原受体修饰的 T细胞(Chimeric ant igen receptors modified T cell s，CAR—T)已成为当下 肿瘤免疫治疗和靶向治疗的研究热点，尤其是靶向CDl9 CAR—T细胞治疗在CDl9 阳性B细胞恶性肿瘤中取得的显著疗效。CARs技术在删治疗领域的应用研究可 能为Ⅲ患者的预后带来新的希望。 目的：本研究选择了cDl 38作为靶点设计对应的cAR结构，通过更换具有更 高表达活性的启动子优化载有CAR基因片段的基因载体，增加CARs的表达水平， 比较优化前后的CAR—T细胞对CDl 38阳性埘细胞系RPMl8226的杀伤活性。 方法：(1)构建裁有cAR基因及不同启动子的基因载体；(2)验证启动子对 下游CAR基因的表达活性；(3)制备优化前后两组靶向CDl 38 CAR—T细胞、流式 细胞术检测；(4)将靶向cDl 38 cAR—T细胞与RPMl8226细胞共培养、检测杀伤 活性。 结果：(1)成功构建了本试验所需要的基因载体；(2)优化后基因载体具有 更高表达活性；(3)成功制备了优化前后两组靶向cDl 38 CAR—T细胞，阳性率分 别为1 3．32％与10．16％；(4)在不同效靶比的情况下，cAR—T组的杀伤活性均高 于CIK组，且PO．05，具有显著差异；不同效靶比下，PwPXL—CAR—T组的杀伤活 性均高于PwPT—cAR—T组，T检验P0．05，差异不显著。 结论：(1)启动子EF一1 o【比EF一1 c【一short具有更高的表达活性，可以用于 增加cAR～T细胞表面cARs的表达水平，说明在启动子水平优化cAR基因载体以 提高细胞表面cARs表达水平是可行的；(2)本研究成功制备了优化前后两组靶 万方数据 解放军医学院硕士学位论文向CDl 解放军医学院硕士学位论文 向CDl 38 CAR—T细胞；(3)靶向CDl 38 CAR—T细胞与未经基因修饰的CIK细胞相 比对cDl 38阳性的RPMl8226细胞具有增强的杀伤活性；(4)增加靶向CDl 38 CAR—T细胞表面CARs的表达水平可能会增加它对CDl 38阳性RPMl8226细胞的杀 伤活性。 关键词：多发性骨髓瘤，嵌合抗原受体，T淋巴细胞，基因工程，启动子 2 万方数据 解放军医学院硕士学位论文Expression 解放军医学院硕士学位论文 Expression optim娩ation of targeting CDl38 chimeric antigen receptor and its cytotoxic effect on RPMl8226 ceⅡs in multiple myeloma Abstract Bacl【gm佃d：M出ple Myelonm(MM)is廿1e second most co衄on haeHlatological malignancy．CloIlal plaSma cells accum_ulate iIl the borle m锄w or e)(t舳edullaD， sites aIld eveI咖面ly give rise t0 renal僦lur