雌激素对慢性高眼压兔视网膜损伤的保护作用及作用机制的研究眼科学专业论文.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 啾躲到釉嗽：岭臀嗡 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研逸研懒臀名：匿 月 日 中文摘要 雌激素对慢性高眼压兔视网膜损伤的保护作用 及作用机制研究 摘 要 目的：青光眼是一种常见的致盲性眼病，其病理基础是 视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)及其神经纤 维的丧失。多种因素与其发病有关，其中病理性高眼压可以 造成视网膜的缺血缺氧损伤并导致RGCs最终以凋亡的形 式丢失。本实验通过用去势和假去势方法研究雌激素在眼部 疾病作用的可行性，并利用前房注射复方卡波姆的方法建立 兔慢性高眼压模型，研究慢性高眼压兔视网膜中的Bcl．2蛋 白家族的表达，观察慢性高眼压过程中雌激素(estrogen)对 视网膜损伤的保护作用，探讨雌激素是否通过上调Bcl一2的 表达抑制细胞调亡的作用机制起到神经保护作用，为临床寻 求青光眼视神经保护的更有效治疗方法提供实验依据。 方法： 1实验动物及分组：将28只成年健康新西兰雌性大白 兔随机分为实验组(去势组)和对照组(假去势组)和正常对 照组：去势组切除两侧卵巢，假去势组仅切除卵巢周围部分 脂肪组织，两组均制造慢性高眼压模型，并按照高眼压持续 的时间分为4周、6周、8周组，每组3只动物，6只眼。 2慢性高眼压动物模型的标准及建立： 慢性高眼压模型以眼压升高大于2．93 kPa(22mmHg)， 并能持续1 wk为标准。利用兔眼前房注射O．3％复方卡波 姆溶液升高眼内压的方法制造慢性高眼压模型。各组分别在 中文摘要模型建立成功后相应的时间点摘除动物眼球，并制成石蜡切 中文摘要 模型建立成功后相应的时间点摘除动物眼球，并制成石蜡切 片o 3血清雌激素水平检测：术前1天、术后2周、术后4 周、术后6周、术后8周，上午9点分别从耳缘静脉采血约 3ml，采用美国Beckman Acess Immunoassy System全自动化 学发光仪检测血清中雌激素浓度。 4视网膜病理组织学观察：HE染色，在光学显微镜下 观察视网膜组织的病理变化。 5免疫组织化学方法检测Bcl．2的表达：光学显微镜下 观察，细胞胞浆呈棕黄色着色者为阳性表达。 6免疫组织化学方法检测Bax的表达：光学显微镜下 观察，细胞胞浆着色呈棕黄色为阳性表达。 7细胞凋亡检测及定性分析：使用TUNEL(terminal deoxynucleotidy transferase mediated X—dUTP nick end labeling)法测定细胞凋亡。光镜下观察，细胞核呈棕黄色 者为阳性。 8闪光视觉诱发电位(F一Ⅵ强)检测：通过F．VEP评 定视神经的损伤情况。观察指标为F—VEP的Pl波潜伏期 LPl(ms)． 结果： l眼压：兔眼眼压用平均值±标准差(页±S)表示。实验 过程中，眼压均值为27．89±1．56mmHg，眼压峰值为35～48 mm Hg。本实验中造模前双眼眼压无明显差异，三组兔的眼压均 值为14．50±1．35mmg。 2视网膜病理组织学观察： 正常对照组兔眼视网膜与 人眼视网膜形态基本相似，各层组织清晰可见，细胞排列整 中文摘要齐均匀，层次分明，无组织坏死及细胞变性。假去势组和去 中文摘要 齐均匀，层次分明，无组织坏死及细胞变性。假去势组和去 势组视网膜均较正常组变薄，视网膜神经节细胞数目明显减 少，视神经纤维层和内核层变薄。假去势组各时间段的视网膜 神经节细胞及神经纤维层厚度较去势组略厚。 3血清雌激素水平测定：假去势组手术前与手术后雌激 素水平平均值经统计学检验，二者间的差异无统计学意义。 去势组手术前与手术后雌激素水平平均值相比有明显的统 计学差异。 4 Bcl．2阳性细胞的表达情况：三组视网膜中Bcl．2表达 在造模后各时间点均有显著性差异，假去势组与去势组相 比，假去势组各时间段的Bcl．2的表达均较高，且差异有统 计学意义。 5 Bax阳性细胞的表达情况：三组视网膜中Bax表达在 造模后各时间点均有显著性差异，假去势组与去势组相比， 假去势组各时间段的Bax的表达均较低，且差异有统计学 ．：￡匕小， 思义o 6 TUNEL阳性细胞的表达情况：三组视网膜中TUNEL 阳性细胞的表达在造模后各时间点均有显著性差异，假去势 组和去势组相比，假去势组各时间段的凋亡细胞的表达均较 低，且差异有统计学意义。 7 F-VEP P1波潜伏期LPl(ms)变化情况：造模后各时间 点去势组和假去势组均比正