vps35对多巴胺受体d1的调控机制研究生理学专业论文.docxVIP

摘要现VPS35对CREB和ERK的活化作用明显减弱，说明VPS35对该信号通路的 摘要 现VPS35对CREB和ERK的活化作用明显减弱，说明VPS35对该信号通路的 激活是通过DRDl所介导。与此同时，当VPS35的水平降低时，多巴胺对该信 号通路的激活明显受到抑制，进一步证实了VPS35参与到DRDl所介导的多巴 胺能信号通路(Dopaminergic Pathway)中。在细胞系中系统地证实了VPS35对 DRDI的转运及信号传导可能存在的调控机制之后，我们用含VPS35干扰序列 的AAV感染野生型小鼠的中脑背外侧多巴胺能神经元，结果显示相较于对照组， VPS35下调组的细胞表面DRDl蛋白水平明显下降，且pCREB／CREB和 pERK／ERK的比值也显著降低。同时用免疫荧光的方法证实了VPS35在多巴胺 能神经元中与DRDl相互作用并调控其分布。 此外，我们发现与帕金森病相关的D620N突变的VPS35虽然仍能与DRDl 在体内相互作用，但过表达该突变体不能有效地调控细胞膜上DRDl的再循环 上膜及降解。在信号转导方面，D620N不能有效激活CREB和ERK，同时相比 野生型VPS35的阳性对照组，在VPS35敲低的情况下过表达D620N不能有效 挽救由VPS35下调造成的CREB和ERK活性抑制。这些结果说明D620N突变 干扰了VPS35的正常生理功能。 综上所述，本研究证实了VPS35通过调节细胞内DRDI的转运，影响DRDl 在细胞膜上的定位，进而调控DRDl介导的多巴胺能信号通路。同时发现VPS35 的缺失和D620N突变在维持DRDl的正常转运及其介导的信号通路功能上存在 缺陷，为进一步揭示帕金森病的致病机制提供了新的思路。 关键词：多巴胺受体1；多巴胺信号通路；帕金森病：转运；VPS35 II 万方数据 Abs订actAbstract Abs订act Abstract Parkinson’S disease(PD)is common progressive neurodegeneratiVe disease mostly occurred in aged people．A major pathology of PD is the loss of dopamine neurons in the brain substantia nigra region，leading to decrease of the synthesis capability of dopamine in epibiotic neurons。Dopamine is essential neurotransmitter and regulates various physiological functions of normal brain such locomotion，emotion and behavior．Dopamine receptors G-protein-coupled receptors and grouped into two classes as D 1·like(D I and D5)and D2一like(D2，D3 and D4)receptors，based their functional properties to stimulate adenylyl cyclase (AC)through Gs／olf to inhibit AC through Gi／o，respectively．Activation of dopamine receptor DI(DRDl)can promote cyclic AMP production and PKA activity， inducing the phosphorylation of ERK and CREB that important for neuronal functions．Dopamine signaling pathways have been found to be impaired in PD，but the underlying mechanism remains largely elusive． Vacuolar protein sorting-35(VPS35)is key subunit of the retromer complex that also includes VPS29 and VPS26．The VPS35／retromer orchestrates the retrieval of membrane proteins from endosome-to-cell surface and endosome-to-Go