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学校代码：10023 学校代码：10023 学号：200701049 博士学位论文 Wipl基因敲除对急性肝损伤的影响及其机制研究 The Im pact of Wip l Gene Knock Out on Acute Liver Inj ury and Mechanisms 专业年级： 北京协和医学院临床医学专业2007级 姓名： 李畅 指导教师： 毛一雷(教授) 北京协和医学院临床学院(北京协和医院) 肝脏外科 完成日期： 2015年6月 万方数据 目录缩略词 目录 缩略词 ．．1 第一章wipl基因敲除对小鼠缺损再灌注损伤的影响及其机制初步研究 。3 中文摘要 ．3 英文摘要 5 第一部分基因敲除小鼠的繁殖及部分肝脏缺血再灌注模型 7 前言 ．7 实验材料 8 实验方法 一10 结果 l 5 1． 小鼠基因鉴定 15 2． 小鼠部分肝脏缺血再灌注手术情况统计 1 5 讨论 16 结论 ． ．．1 8 第二部分肝脏缺血再灌注损伤在wipl基因敲除小鼠中的表现 19 前言 ～19 实验材料 一22 实验方法 一25 结果 36 1． wipl基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤减轻 一36 2．wipl基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤后肝脏病理改变减轻 36 3． wipl蛋白在肝脏缺血再灌注损伤的表达下降 一37 4．wipl基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤过程中P13K／AkgmTOR通路蛋白磷 酸化发生改变 ．．38 5． wipl基因敲除小鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡率明显下降 ．．39 讨论 z11 结论 43 参考文献 一44 致谢 ．46 附勇毛 ．47 万方数据 缩略词IIu 缩略词 IIu Ischemia-Reperfusion Injury 缺血再灌注损伤 dNTP Deoxy—ribonucleoside 脱氧核糖核苷三磷酸 tfiphosphate PBS Phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液 Tris Tris(hydroxymethyl)aminom 三羟甲基氨基甲烷 ethane EDTA Ethylene diamine tetraacetic 乙二胺四乙酸 acid HOAc Acetic acid 乙酸 NaOH Sodium hydroxide 氢氧化钠 TAE Tris acetate buffer 秭s乙酸缓冲液 TE Tris．Hcl／EDTA buffer 晡s盐酸／EDTA缓冲液 IU∑PCR Reverse transcription 反转录聚合酶链反应 polymerase chain reaction Real．time PCR Real—time polymerase chain 实时荧光定量聚合酶链反 reaction 应 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 propanesulfonic acid FA Formaldehyde agarose 甲醛变性胶 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 NaCl Sodium chloride 氯化钠 NO Nitdte oxidate 一氧化氮 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 RU Relative 1evel 相对单位 NF．rd3 Nuclear factor kappa beta 核转录因子rB TNF．c【 Tumor necrosis factor alpha 肿瘤坏死因子Q BSA Bovine serum album 小牛血清白蛋白 Acr Acrylamide 丙烯酰胺 TEMED Tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 APS Ammonium persulfate 过硫酸铵 ECL Electrochemiluminescence 电化学发光 BCA Bicinchonin；C acid 二喹啉甲酸 万方数据 NaAc NaAc Sodium acetate 醋酸钠 KCl Potassium ehloride 氯化钾 HE Hematoxylin and eosin 苏木素伊红染色 TBS ri ds—buffered saline ％s盐缓冲液 DAB 3,3-Diaminobenzidine 二氨基联苯胺 TUNEL Terminal-deoxynucleotidyl 原位末端标记法 Transfe：rase Mediated dUTP Nick End Labeling HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 2