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沙利度胺对组胺诱导后的人真皮成纤维细胞增殖活性及ⅰⅲ型胶原蛋白端粒酶mrna的影响皮肤病与性病学专业论文
河北医科大学
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研究生签名: 导师签章:
力稗;库留.曰
万方数据
目
目 录
中文摘要 1
英文摘要 5
英文缩写 ..10
研究论文沙利度胺对组胺诱导后的人真皮成纤维细胞增殖活性及I、 III
型胶原蛋白、端粒酶mRNA的影响
前言月fJ舌 .11.11
材料与方法 ..12
结果 19
附图 ..22
附表 ..25
讨论 ..28
结论 ..32
参考文献 ..34
综述端粒、端粒酶和皮肤科疾病 37
致谢 ..48
个人简历 ..49
万方数据
中文摘要沙利度胺对组胺诱导后的人真皮成纤维细胞增殖活性及I、III
中文摘要
沙利度胺对组胺诱导后的人真皮成纤维细胞增殖活性及I、III 型胶原蛋白、端粒酶mRNA的影响
摘 要
背景:成纤维细胞的异常增生或胶原蛋白的代谢失衡是病理性瘢痕和 纤维化疾病致病原因之一【1】。端粒对于保持染色体稳定性和细胞活性有重 要作用,端粒酶能通过延长缩短的端粒来增强体外细胞的增殖能力。端粒 酶催化亚单位TERT是其关键的限速酶【2】。目前已有研究证明瘢痕疙瘩中 成纤维细胞端粒酶活性明显增高【3】。近年来,沙利度胺在治疗纤维化性皮 肤病及人类其他脏器的纤维化疾病的相关报道越来越多,国内外已有研究 证实沙利度胺对纤维化性皮肤病及其他脏器的纤维化疾病均有抑制作用 [4-5]。在沙利度胺和端粒酶作用的相关研究中,有结果显示沙利度胺可通 过下调hTERTmRNA转录水平,抑制端粒酶活性来诱导多发性骨髓瘤 U266细胞凋亡、抑制细胞增殖【6】。组胺作为皮肤纤维化疾病活化刺激因 素之一,它可促进成纤维细胞生长、增殖及促进胶原蛋白合成f_71,与病理 性瘢痕的形成关系密切【8】。目前,关于沙利度胺对人正常真皮成纤维细胞 增殖及胶原的表达的直接影响尚无报道;关于沙利度胺对经组胺刺激活化 后成纤维细胞增殖活性、I、III型胶原蛋白及端粒酶的直接影响也未见报 道。因此,本研究检测,经组胺刺激后,活化增生的成纤维细胞在沙利度 胺干预后,对其增殖活性、端粒酶活性及I、III型胶原蛋白mRNA的直 接作用,以探讨沙利度胺在抑制活化后的成纤维细胞的增殖、降低其端粒 酶活性及胶原表达方面的直接作用,从而研究沙利度胺在抗真皮纤维化的 潜在作用,为防止术后瘢痕形成及对病理性瘢痕的临床治疗和预后提供新 的指导思路。
目的:探索沙利度胺对组胺诱导后的成纤维细胞增殖及I、III型胶原
蛋白、端粒酶活性的mRNA表达的直接影响。
方法:
1正常真皮成纤维细胞原代培养,并经波形蛋白免疫组化染色,行细 胞鉴定,取第4代细胞进行试验。
2 CCK.8测正常成纤维细胞增殖活性:细胞消化后接种于96孔培养板
万方数据
中文摘要中,每组均设置5个重复孔,各组分别中加入含有浓度分别为0(空白对
中文摘要
中,每组均设置5个重复孔,各组分别中加入含有浓度分别为0(空白对 照组)、10~mol/L、104mol/L、10。5mol/L含沙利度胺的DMEM培养基, 用CCK.8法检测沙利度胺作用24h后细胞在560nm处的光密度值(OD 值),对结果进行统计学分析。
3实验分组及CCK.8测经组胺刺激后的成纤维细胞增殖活性 实验分为空白对照组(K组)、沙利度胺处理组(S组)、组胺处理组
(Z组)、组胺+沙利度胺处理组(Z+S组)。取成纤维细胞单细胞悬液, 浓度为2×104/m1,每孔200ul接种于96孔板,Z组及Z+S组分别加入 200ul 100UM的组胺工作液,K组及S组加等量空白培养液,共同培养
48小时。弃去各组培养液,S组及Z+S组更换10巧mol/L沙利度胺液,其 余两组加入等量DMEM.每组设5个复孔,继续培养24小时。采用上述 CCK.8法测得OD值,并对以上数值进行统计学分析。
4采用SYBR Green I染料法荧光定量PCR测定COL.I、 COL.IIImRNA的表达情况及统计学分析
按上述分组要求处理细胞,每组设三个样本,均接种在25mL培养瓶 中继
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