exosome用于抗hbv免疫治疗的实验研究内科学传染病专业论文.docxVIP

学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明 学位论文原创性声明和版权使用授权书 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 工作所取得的真实成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 作者签名： 导师签名：艺筮盘! 型筮年—￡月上三日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 作者签名：l凇锯1 导师签名：铝．孑I ．迎＆年』月』竺日 Exosome用于抗I-IBV免疫治疗的实验研究 Exosome用于抗I-IBV免疫治疗的实验研究 中文摘要 目的 初步探索Exosome体外抗HBV特异性免疫活性。 方法 以细胞因子GM．CSF、II，4及TNF．0【培养健康人PBMC来源的DCs，通过流式 细胞仪分析细胞表型判断所收获的DCs成熟度；采用多步骤离心法分离纯化DCs 培养上清中的Exosome，western blotting分析蛋白性质；以HBcAg刺激DCs， MTS法检测收获的HBcAg特异性DEXs刺激PBMC增殖的能力、ELISPOT法 检测HBcAg特异性DEXs刺激的PBMC产IFN-Y的能力。 结果 成熟DC表面HLA-DR、CD80／CD86及CD83分子的表达水平明显高于未成熟 DC者(分别为45．3±8．3％VS 16．5±6．8％、90．2±6．5％／92．38±13．6％VS 6．3± 4．5％／49．8±9．2％、83．53±10．8％VS 4．3±2．8％，P0．05)；成熟DCs分泌的 Exosome表达HLA-DR、CD86分子也强于未成熟DCs分泌者；淋巴细胞增殖实 验结果显示HBcAg特异性DEXs体外刺激PBMC增殖能力强于未成熟者(吸光 度0．904+0．003 VS 0．545 4-0．010，P0．001)，但不如HBcAg特异性mDCs(O．904 ±O．003 VS 1．0344-0．004，P0．05)；HBcAg特异性DEXs刺激的PBMC产FN-f 能力强于未成熟者(斑点数32+13 VS 14+2，P0．05)，但也不如HBcAg特异 性mDCs(32+13 VS 98+17，P≤0．01)。 结论 HBcAg特异性mDEXs可有效激活自体PBMC增殖及分泌IFN-Y，其体外抗HBV 特异性免疫活性强于未成熟者。 【关键词】Exosome树突状细胞HBV 免疫治疗 4 The The potential of dendritic cells-derived exosomes in immunotherapy of chronic hepatitis B infection Abstract 删 To determine whether dendritic cell’derived exomes loaded with Hepatitis B core antigen could induce the proliferation of autologous lymphocyte． METHEDS DCs were generated from PBMCs(peripheral blood monouclear cells)of healthy dono娼．Exosome secreted from DCs were purifed by ultracentrifugation and the molecules of exosome were identited by western blotting．Autologous lymphocyte proliferation assays and ELISPOT were used to evaluate the efficacy of DEXs loaded with I-IbcAg． RESUIT Mature DCs had a higher expression of HLA-DR，CD83 and costimulatory molecules CD80／CD86 Compared to immature DCs(45．3±8．3％VS 16．5±6．8％、83．53±10．8％ VS