凡纳滨对虾白斑综合症病毒感染相关基因的克隆与功能研究海洋生物学专业论文.docxVIP

作为抗原免疫小白鼠，制各抗融合蛋白的血清，并进一步进行理化分析表明，两 作为抗原免疫小白鼠，制各抗融合蛋白的血清，并进一步进行理化分析表明，两 个重组蛋白对鱼、兔子、小鼠及鸡等脊椎动物血细胞均具有凝集活性，而且这种 凝血活性可被D．果糖、D-半乳糖、乳糖、D．甘露糖和D．葡萄糖和EDTA所抑制； 而Ca“则对其凝血活性具有促进的作用。两者均能促进PO活性的提高。点杂交 结果显示，Lvlectin4E和Lvlectin5D重组蛋白对WSSV表现出特异的亲和力，其 中Lvlectin4E比Lvlectin5D的亲和作用更强。 通过在对虾原代细胞和活体实验表明，两个重组蛋白具有一定的抗病毒作 用。用WSSV浓度为10‘3感染凡纳滨对虾原代培养细胞3d后，对照组中被感染 细胞有少量死亡，也有少量的碎片出现，而Lvlectin4E重组蛋白与WSSV孵育 后感染的仍无细胞死亡，但Lvlectin5D重组蛋白处理组也出现少量死亡；5d后， 对照组中感染的细胞大量死亡，细胞碎片堆增大，而Lvlectin4E重组蛋白与WSSV 孵育后感染的只有少量细胞死亡，LvlectinSD重组蛋白处理组也出现较多细胞聚 集成堆，部分细胞死亡，但比对照组明显的少，而且出现死亡的时间也相对晚。 在对虾活体中进行重组蛋白保护试验结果显示，Lvlectin4E和Lvlectin5D与 WSSV孵育后注射对虾均能推迟对虾发病时间，在对照组已发病全部死亡时，处 理组还有70％存活，达到显著差异；WSSV感染11天后保护率分别达到57％和 43％。但是，先注射WSSV后注射重组蛋白，或先注射重组蛋白后注射WSSV， 均与对照组死亡率没有明显的差别。 关键词：凡纳滨对虾；白斑综合症病毒(WSSV)；抑制性消减杂交(SSH) 免疫相关基因；C型凝集素；融合表达；功能分析 VI Molecular Molecular Cloning，Characterization and Functional Analysis of two Immune-relevant Genes in Shrimp Response to White Spot Syndrome Virus Name： Zhao Zhi Ying Supervisor：．Professor He Jian Guo，Ph．D． M蚶OK Marine Biology The Pacific white shrimp(Litopenaeus vannamei，Boone，1931)，which belong to the Litopenaeus genus，Penaeidae family,is a tmpic marine shrimp species．The shrimp with its good qualities of cultivation and h逗h economic value has already become the most important species of cultural shrimp throughout the world， especially in China,which culture not only in the sea water but also in the freshwater． However,with the rapid production and development of L vannamei worldwide， shrimp diseases have become severe and threaten the shrimp industry in recent years． White spot syndrome，caused by white spot syndrome virus(wssv)，is an acute fatal pandemic disease in shrimp and most other crustaceans．The outbreak and spread of WSSV has resulted in high mortality and huge economic losses in many regions of the worm．Preventing and controlling the spread of disease has become a priority to the shrimp industry．Two aspects of this pathogenic problem have attracted people’S attention：the infectious mechanis