反应型次氯酸荧光探针的合成和应用应用化学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 在过去20年中，荧光技术在生物化学和生物物理学中的应用都得到了突飞猛进的 发展。现如今荧光成像技术已经成为了一种方法学而被广泛应用于生物技术，流式细胞 术，疾病的诊断，DNA的测序、鉴定及基因的分析等领域。次氯酸(HCl0／CIO’)是一 种重要的活性氧物种，细胞在正常环境下产生内源性次氯酸能够杀灭外来的细菌和病原 体。然而，次氯酸的过量产生，会导致细胞内生物分子的非正常氧化，并引起组织的损 伤和一系列疾病的发生等。因此，能够快速选择性监测生物样本中次氯酸浓度变化的荧 光探针的开发设计，越来越受到关注。 本论文中以次氯酸在环境和生物细胞中的检测为目的，荧光检测为手段，综合运用 分子识别和分子荧光传感的原理设计合成了两例次氯酸荧光探针。 以N．杂香豆素为荧光染料母体引入识别基团l，8．二萘胺，基于缩醛胺氧化机理，设 计合成了一例“off-on”型次氯酸荧光探针AC-CIO，探针分子本身由于PET效应不发 射荧光，当与次氯酸作用之后，识别基团部分被氧化，PET效应被抑制，在576 nm处 发射出强烈的荧光，反应较迅速(2分钟内达到饱和)，选择性好，最低检测限低(25 nM)， 而且随着次氯酸浓度的增大，溶液颜色由粉红色逐渐变为淡黄色，能够实现可视化检测。 荧光共聚焦成像实验表明探针AC-CIO能够用于检测细胞内源和外源性次氯酸，而且随 着刺激物浓度的增大，细胞内荧光强度不断增大。 我们将吡咯基团引入BODIPY荧光母体的3位，使之形成一个更大的79-／l共轭体系， 基于吡咯氧化机理，设计合成了一例比率型次氯酸荧光探针BRCIO。当与次氯酸反应 后，毗咯基团中的N原子被氧化为N—O配合物的形式，破坏了吡咯基团与BODIPY母 体的共轭，使荧光发射波长由585 nin处蓝移到505 nIn，二者形成很好的线性关系。且 反应前后有177倍的比率荧光增强，反应相当迅速，几乎瞬间达到饱和(1 s内)，对 其他活性氧有较好的选择性。根据荧光共聚焦成像实验我们还发现探针分子BRCIO能 够对细胞内次氯酸进行成像，而且反应前后信号实现很好的分离，反应前探针本身主要 定位在细胞质区域，而与次氯酸反应后的产物主要定位于细胞膜上。同时探针分子 BRClo还可以用于试纸中次氯酸的检测。 关键词：荧光探针：次氯酸；检测限；识别；细胞成像 万方数据 反应型次氯酸荧光探针的合成和应用The 反应型次氯酸荧光探针的合成和应用 The Synthesis and Application of Reaction—Based Fluorescent Probes for Hypochlorous Acid Abstract During the past 20 years there has been a remarkable growth in the use of fluoresecence in the biochemistry and biophysics．Fluorescence is now a dominant methodology used extensively in biotechnology，flow cytometry，medical diagnosetics，DNA sequencing， forensics，and genetic analysis，to name a few．Hypochlorous acid(HCl01 iS an important ROS which is endogenously generated in cellular environments to kill invading bacterial pathogens．Excessive production of HCl0，however，leads to the oxidation of biomoleeules which results in tissue damage and various diseases such as atherosclerosis．arthritis and cancer．Thus，sensitive and accurate detection probes for hypochlorous acid that function in living sample are highly demanded for the research in biology and environment． In this thesis，two fluorescent probes based on molecular recognition and mol