《SNT1165.1-2002-蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验操作规程》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1165.1-2002 蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验操作规程 ProtocolofcompetitiveELISAforbluetongue 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 SN/T 1165.1-2002 月臼 吕 蓝舌病(BLuetongue)竞争酶联免疫吸附试验(C-ELISA)是在参考国际兽疫局(OIE)((哺乳动物、禽 和蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》和实践经验的基础上制定。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:花群义、周晓黎、徐自忠、董俊。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1165.1-2002 蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验操作规程 范围 本标准规定了蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验方法。 本标准适用于反当动物蓝舌病抗体检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法 (eqvISO 3696:1987) 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 3.1BTV:蓝舌病病毒 3.2 C-ELISA:竞争酶联免疫吸附试验。 3.3 McAb:单克隆抗体。 3.4 PI:抑制百分比。 3.5 羊抗鼠IgGHRP:辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠馆G. 3.6 OD值:光密度值。 4 原理 被检血清和BTV群特异性单克隆抗体(McAb功A人已用BTV-VP7抗原包被的酶标板孔，在37C 下反应，二者同时竞争与孔内相应的特异性包被抗原结合，加人酶标羊抗鼠工gGHRP，洗去未结合的抗 体，然后加人底物显色。使用酶标仪测定反应物的OD值 ，计算抑制百分比((PD，就可以判定试验结果 5 试剂和材料 5.1 包被抗原:蓝舌病病毒VP7抗原，由指定单位提供。 5.2 血清:蓝舌病标准强阳性、弱阳性血清、阴性血清，由指定单位提供。 5.3 被检血清:牛血清56C^-57℃灭活30min，羊血清58C-59C灭活30min 5.4 蓝舌病病毒群特异性单克隆抗体:由指定单位提供。 5.5 羊抗鼠IgG-HRP:按说明书指定的工作浓度稀释使用。 包被液、洗涤液、稀释液、底物液、终止液:参见资料性附录A :.( 水:符合GB/T6682-1992分析实验室二级水规格。 器械 和设备 6.1 酶标仪。 6.2 可拆96孔酶标板 SN/T 1165.1-2002 6.3单孔道、多孔道可调微量移液器(1yL,50tL,100pL,l000IcL)、微量滴头。 6.4 吸管(5mL,10mL), 6.5 刻度量筒(100mL,l000mL), 6.6 试剂瓶(50mL,100mL,500mL), 6.7 洗涤瓶(500mL), 6.8 贮液器。 6.9 计算器。 6.10 370C恒温箱。 7 蓝舌病竞争酶联免疫吸附试验 7.1 包被酶标板:按照提供的包被抗原所附说明书要求，用包被液稀释抗原，包被96孔酶标板，每孔 50IiL，置4℃冰箱过夜。 7.2 按 1:10稀释强阳性、弱阳性、阴性对照血清和所有被检