干扰素调节因子7dna结合结构域中赖氨酸残基的作用微生物学专业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 干扰素调节因子7(Interferon regulatory factor 7，IRF．7)是IRFs中重要的成员 之一，它主要在两个方面起重要的作用：调节干扰素的表达和参与抗病毒的免 疫反应。IRF．7是一个DNA结合蛋白，共有503个氨基酸，其中氨基末端1．151 个氨基酸为其DNA结合结构域(DNA binding domain，DBD)，DBD在其与干扰 素刺激应答元件(IFN stimulated response element，ISRE)结合时起到关键的作 用。IRF．7的功能也可以通过包括磷酸化、乙酰化、泛素化和类泛素化的翻译后 修饰来调节。赖氨酸残基是乙酰化、泛素化和类泛素化的潜在修饰位点，所以 赖氨酸残基上的修饰可能是IRF．7进行功能调节的策略。IRF．7的DBD中分布 着5个赖氨酸，目前已有研究表明，部分赖氨酸残基的突变会对IRF．7的功能造 成影响，而DNA结合结构域中的个别赖氨酸残基的突变会使IRF一7几乎完全失 活。 本文通过定点诱变将DNA结合结构域内的赖氨酸残基突变为精氨酸残基， 构建了6个表达质粒，它们可以在大肠杆菌细胞中表达融合了His和FLAG标 签的IRF．7 DBD重组蛋白以及突变体蛋白。其中His，FLAG标签分别用于纯化 和检测；纯化这六个重组蛋白，并对它们进行定量；最后利用DNA．BIND微孔 板测定它们与ISRE的结合。结果发现IRF．7 DBD与ISRE的结合具有特异性。 当赖氨酸突变型与野生型等量的情况下，与DNA结合的能力都变弱了。与野生 型相比：K45R、K50R、K61R、K92R和K120R分别降低到野生型的13％，54 ％，22％，28％和16％。本文的结果为研究赖氨酸残基在IRF．7结合活性中的 作用提供了实验证据，也为进一步利用DNA．BIND：微孔板检测DNA与蛋白的 相互作用提供了基础。 关键词：赖氨酸突变、干扰素调节因子7、DNA结合结构域、DNA．BIND微孔 板、DNA．蛋白相互作用 AbstractInterferon Abstract Interferon regulatory factor 7(IRF．7)is a member of the IRF family,which plays important roles in two aspects．One is regulating the expression of interferon and the other is Darticipating in the antiviral immune response．IRF一7 is a DNA-binding protein．containing 503 amino acids．The N—terminal 1 5 1 amino acid residues of IRF．7 constitute its DNA binding domain(DBD)，which is responsible for its binding to the interf．eron．stimulated response element(ISRE)．The function of IRF-7 carl be regulated by post．translational modifications including pho sphorylation，acetylation， ubiquitination and SUMOylation．Lysine residues are potential sites tbr these modifications，and may serve as targets to modulate the functions of IRF-7．There are five lysine residues in the IRF．7 DBD．It has been rep·orted that lysine residue mutationS may have affected the function of IRF-7，and some lysine residue mutaftons in the IRF．7 DBD may have abolished the function of IRF-7． In“s studv’each of the lysine residues of IRF一7 DBD was modified into the arginine residue by site．directed mutagenesis．Six expression plasmids were constmc