博纳德对大鼠脑缺血再灌注后神经内分泌免疫网络相关基因的调节作用中医内科学专业论文.docxVIP

主塞垫里—————————————————————————!一中文摘要 主塞垫里—————————————————————————!一 中文摘要 f 1．背景 ＼、 约有20％-55％1的中风患者在3 个月内出现智能减退，其中40。,4左右为血管性痴呆 中医药治疗VaD 已有了一些尝试，但有关中药复方对该病的治疗机理尚 于利用现代科学分子技术，遵循中医整体的非特异陛调节理论，以脑缺血 ．再灌注后神经内分泌免疫网络相关基因为靶点，探讨中药复方对脑缺血一再灌注后神经元变 性损伤的保护作用机制。 ^．假说 L 脑缺血一再灌注后可诱导神经呐分泌．免疫网络(N-E1)紊乱导致脑功能损伤：补肾活血 化痰法对NEI网络具有调节作用。 4．方法 4．1建立脑钦血_再灌注后神络内分泌．免疫网络紊乱及其行为障碍模型。 4．2(1)采用大脑中动脉梗塞模型，多发性梗塞模型、去脑膜血管性痴呆模型，分别采用行 为93-法(跳台法，避暗法．水迷路法)进行检测，观察实验大鼠学习记忆能力以及博纳德 治疗的改善情况。(2)采用放射免疫法测定脑组织和血清中IL·1 D、IL-2、IL-6的活性，观察 博纳德对上述三种模型大鼠脑组织和血清中炎陛细胞因子的改变情况。(3)采用脏染色光镜 和透射电镜分析，观察博纳德对大脑中动脉梗塞钝虹-再灌注大鼠海马CAl区神经元细胞的 保护影响。(4)采用免疫组化方法探讨大脑中动脉梗塞缺血．再灌注大鼠脑组织中IL-1 0、c- los、CRF蛋白表达的时NJ觅feNY-种分子表达的时序性以及博纳德对它们表达高峰时点的 调节作用。(5)采用原位杂交方法观察博纳德对大脑中动脉梗塞缺血-再灌注大鼠脑组织中IL- l 6 mRNA、CRFmRNA的调节作用。 5．结果 5．1我们的研究证明：大脑中动脉梗塞后可致大鼠学习记忆行为障碍；大鼠短暂脑《a．g-再灌 注后出现NEI网络调节障碍；有关基因表达具有明显时间规律． 5．2补肾活血化痰法可调节NEI网络并改善模型的学习记忆等功能。 5．2．I大鼠拟血管性痴呆模型的建立和博纳德对学习记忆行为的改善作用 (17使用的三种模拟血管性痴呆模型(大脑中动脉梗塞模型，多发性梗塞模型、去脑膜 血管性痴呆模型)利用行为学方法进行检测，三种模型与假手术组比较均出现学习记忆能 力的降低．(2)博纳德组能使多发性脑梗塞造模组、中动脉脑栓塞造模组、去脑膜造模组的 行为学检测指标改善，统计学上有显著差异(pm．05或po．01)，与都可喜组比较无差异 re0．05)。表明博纳德与都可喜治疗血管性痴呆的效果相近，对多发性脑梗塞模型组、中动 脉脑栓塞模型组，去脑膜模型组大鼠的记忆力减退障碍均具有明显改善作用． 5．22,博纳德对血管性痴呆大鼠相关细胞因子的影响 上述三种模型大鼠连续喂饲博纳德4周后，血清和脑组织中下降的IL-2、IL-6含量均有 4 4 博纳德对大鼠脑缺血后神经内分泌免疫网络相关基因的调节作用 不同程度的升高，且均呈一定的量效关系；血清和脑组织中下降的IL-I D未见明显变化． 523大脑短暂脑缺血．再灌注后IL-1 B、c-fos、CRF蛋白表达的时间规律 通过图象分析仪定量和半定量分析，大脑中动脉梗塞脑钝缸-再灌后大鼠IL-1 B蛋白从1 小日据开始表达，2小时时表达达到高峰，高峰时间持续至3小日十后开始表达减弱，至第7 夭表达基本消失．C-fos蛋白表达从2小时开始，3小时表达大量增加，4小时达到高峰，至 第4天表达消失．CRF蛋白从8小时开始表达，12小时表达达到高峰，随后表达减弱，但 是当第7天时表达开始进入第二次高峰．IL-I D、c-fos、CRF三种蛋白表达产生和高峰时点 出现时间上先后次序。 52．4博纳德对大脑中动脉梗塞脑钦血_再灌注后神经元的保护作用 对博纳德治疗后的大脑中动脉梗塞大鼠进行HE染色光镜和透射电镜分析，发班博纳德 具有脑缺血损伤后神经元细胞保护作用，能够明显改善缺血再灌后神经元损伤，减轻神经细 胞水肿、对神经细胞起到保护作用。根据使用剂量的不同发现其具有一定量效关系，大剂量 组疗效接近阳性对照组IL-lra．说明博纳德能够在一定程度L对抗缺血再灌注导致的神经元 变性，从而保护神经细胞，效果等同于神经保护剂Ⅱ，lm． 5．25博纳德对大脑短暂脑觇血．再灌注后IL-1 D、c-fos、CRF蛋白的调节作用 博纳德抑制了脑缺血后IL-1 D、c-fos、CRF三种蛋白在高峰时间点的表达，同模型组 比较均有极显著性差异(p锄．01)或显著性差异(p如．05)。其大剂量组对三种蛋白的抑制效果近 似于IL-lra对照组对照组IL-lm(P0．05)o 5．2．6博纳德对大脑短暂脑缺血-再灌注后Ⅱ，1 I，mRNA、CRF