v3肽抑制s180和h22裸鼠移植瘤血管生成的实验研究细胞生物学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：羡j，粕， 日期：扣乃年皇月厂o El 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：夏青／聋哥7 日期：厶／矿年r月 J J 摘要摘要 摘要 摘要 目的 研究V3肽在体内抑制裸鼠S1 80肉瘤和H22肝癌移植瘤生长及其抗血管生 成作用，并探讨其作用机制；观察V3肽对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (mⅣEC)和H22肝癌细胞增殖的影响及对裸鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏 器和免疫系统有无毒性，为进一步将其开发成为具有临床应用价值的血管生成 抑制剂提供一定的理论和实验依据。 方法 1．采用MTT方法测定V3肽对体外培养的HUVEC细胞和H22细胞增殖的 影响。 2．体外培养S180肉瘤和I-L22肝癌细胞株，建立裸鼠移植瘤模型。 3．将成瘤裸鼠随机分为7组：阴性对照组(NS)、V1组(320 tLg／kg)、V2 组(320 ttg／kg)、VI+V2组(320 I．tg／kg)、V3低剂量组(160 ttg／kg)、V3中 剂量组(320 ttg／kg)、V3高剂量组(480 ttg／kg)，观察V3肽对裸鼠S180和 I-122移植瘤生长的影响。 4．采用HE染色技术，观察裸鼠心、肝、脾、肺、肾及移植瘤的形态结构。 5．采用CD34免疫组织化学技术，计数移植瘤组织中的微血管数目。 6．采用外周血白细胞计数、计算肝、脾、肾指数和测量裸鼠体重变化等方 法检测V3肽的毒性大小。 结果 1．MTT结果表明V3肽对体外培养的HUVEC细胞和H22肝癌细胞增殖无 明显抑制作用。 2．所有裸鼠接种肿瘤细胞成功，成瘤率100％，成功建立裸鼠移植瘤模型。 3．V3肽对S180和H22裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用，呈剂量依赖 关系。在S180移植瘤中，V3肽低、中、高三个剂量组的抑瘤率分别为41．5％、 48．0％、52．6％；在H22移植瘤中，V3肽低、中、高三个剂量组的抑瘤率分别 为36．0％、45．5％、56．8％，与阴性对照组相比，统计学差异显著(尸0．01)。在 相同浓度，即320 pg／kg时，V3肽的抑瘤效果比V1、V2肽的抑瘤效果明显p 摘要0．05)。 摘要 0．05)。 4．HE染色结果显示各组裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等器官无明显形态学变 化，并且未发现肿瘤侵袭现象。随着V3肽浓度的提高，肿瘤坏死区域逐渐扩大。 在320 pg／kg这一浓度下，V3组的坏死区域比Vl、V2和VI+V2组的坏死区域 大。 5．免疫组织化学结果显示，与阴性对照组相比，V1、V2、VI+V2和V3组 的微血管密度(MVD)明显降低p0．05)。在320 gg／kg这一浓度下，V3组的 微血管密度比Vl、V2和VI+V2组的微血管密度明显降低(尸0．05)。 6．裸鼠外周血白细胞计数及肝、脾、肾指数计算结果表明各组之间无统计 学差异(尸0．05)。与阴性对照组相比，v3高剂量组裸鼠体重变化在H22移植 瘤中具有统计学差异俨0．05)，其余各组裸鼠体重变化无明显差异俨0．05)。 结论 1．V3肽能明显抑制S180肉瘤和I-122肝癌裸鼠移植瘤的生长，随着V3肽浓 度的提高，抑瘤作用逐渐增强。 2．V3肽具有显著的抑制S180肉瘤和H22肝癌裸鼠移植瘤血管生成的作用， 其作用机制可能与同时抑制VEGFR-2和Tie．2介导的信号通路有关。 3．V3肽对裸鼠外周血白细胞数目及肝、脾、肾指数无明显改变，表明V3 肽对裸鼠机体的免疫功能和重要脏器无明显影响。但在H22移植瘤模型中，V3 肽高剂量组(480ttg／kg)裸鼠体重变化与阴性对照组相比具有统计学差异，提示 高剂量组V3肽有轻微毒性。 4．V3肽对体外培养的HUVEC细胞和H22细胞增殖无明显抑制作用，提示 V3肽的作用机制主要是通过抑制肿瘤血管生成从而抑制肿瘤生长来实现的。