visfatin基因过表达对大鼠胰岛素敏感性fgf21及脂代谢的影响临床检验诊断学专业论文.docxVIP

重庆医科大学硕士研究生学位论文Visfatin基因过表达对大鼠胰岛素敏感性，FGF．21及 重庆医科大学硕士研究生学位论文 Visfatin基因过表达对大鼠胰岛素敏感性，FGF．21及 脂代谢的影响 摘 要 目的：构建大鼠内脏脂肪素(visfatin)基因pcDNA3．1(+)真核表 达载体并转入大鼠，观察visfatin基因过表达对正常饮食及高脂饮食大 鼠胰岛素敏感性，FGF．21和糖脂代谢的影响。 方法：l、构建pcDNA3．1(+)一visfatin真核表达质粒。2、将 pcDNA3．1(+)．visfatin质粒转入正常饮食(NT组)及高脂饮食(HT组) 大鼠，并以正常饮食pcDNA3．1(+)空质粒(NC组)为对照，采用正糖 ．高胰岛素钳夹技术评价大鼠胰岛素敏感性改变，同时测定血糖、血脂、 血浆visfatin和FGF．21的变化。3、用dot．blot方法测定肝脏、脂肪、 肌肉组织IRSl的磷酸化水平。4、用RT-RCR和Westemblot方法测定 肝脏和脂肪组织脂代谢相关基因及蛋白水平的变化。 结果：l、成功构建了重组质粒pcDNA3．1(+)．visfatin。2、质粒转 染后3天，NT组和HT组大鼠血浆visfatin水平均明显升高(PO．01)， NT组血浆基础胰岛素水平明显降低(PO．05)，葡萄糖输注率较转染 前显著升高(PO．01)。肝脏、脂肪、肌肉组织IRSl磷酸化的水平明 显增高(PO．05)，NT组和HT组大鼠肝脏PPAR7 mRNA的表达均 明显升高(分别为P0．05和P0．01)，NT组大鼠脂肪组织PPAR7 mRNA亦显著升高(P0．01)，而HT组则仅有升高趋势(PO．05)：3、 重庆医科大学硕士研究生学位论文与质粒转染前相比，各处理组大鼠血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋 重庆医科大学硕士研究生学位论文 与质粒转染前相比，各处理组大鼠血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋 白胆固醇(HDL—C)水平明显降低(PO．05)。SREBP2 mRNA表达均 明显高于对照组(PO．05)， NT组HMG CoA还原酶mRNA水平明 显高于NC组和HT组(PO．05)，NC组与HT组无明显差异；4、NT 组大鼠脂肪组织ATGL mRNA及蛋白水平均明显高于NC组和HT组 (PO．05)，且HT组高于NC组，但无统计学意义。5、与质粒转染 前比较，NT组大鼠血浆FGF．21水平明显下降(PO．05)，而HT组大 鼠血浆FGF．21水平明显升高(PO．05)；肝脏FGF．21 rnRNA及蛋白 水平变化与血浆FGF．2 1变化趋势一致。 结论：1、成功构建了重组质粒pcDNA3．1(+)一visfatin。2、重组质 粒使血浆visfatin水平明显升高，增强了大鼠胰岛素敏感性，血浆总胆 固醇水平明显下降，并提高了脂肪组织ATGL mRNA及蛋白水平，同 时对FGF．2l的表达产生极大的影响。 关键词：visfatin，成纤维细胞生长因子21，胰岛素敏感性，胆固 醇，脂肪甘油三酯水解酶 4 重庆医科大学硕士研究生学位论文THE 重庆医科大学硕士研究生学位论文 THE EFFECTS OF VSFATIN GENE OVEREXPRESSl0N oN INSULIN SENSITIVITY，FGF．2 1，TIUG“CERID AND CHOLESTERoL METABOLISM IN RATS ABSTACT objeetive：To construct the eukaryotic expression vector of visfatin (pcDNA3．1(+)一visfatin)and transfect it into normal and high fat—diet rats； To investigate the effect of．visfatin gene overexpression on insulin sensitivity,glucose and lipid metabolism and cytokine in these rats． Methods：1．The recombinant vector(pcDNA3．1(+)-visfatin)was constructed and transfected into normal and high—fat diet rats．2．The euglycemic—hyperinsulinemic clamp experiments were performed for evaluation the change of insulin sensitivity．The effect of Visfatin Was evaluated o