stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌hep2细胞杀伤和抑制作用的分子机制耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

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  • 2019-01-30 发布于上海
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stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌hep2细胞杀伤和抑制作用的分子机制耳鼻咽喉科学专业论文.docx

stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌hep2细胞杀伤和抑制作用的分子机制耳鼻咽喉科学专业论文

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名:聿赫鲜导师签名秀诧撕学院领导签名:渤 丽年3月们日 | 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:彳南珲 新躲刎 b恣年b Q年 1月0月 中文摘要Stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌Hep 中文摘要 Stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌Hep 细胞杀伤和抑制作用的分子机制 摘 要 目的:通过stat3反义寡核苷酸(ASODN)转染与60Co照 射喉癌Hep.2细胞株探讨对Hep.2细胞株增殖抑制、细胞周 期变化、蛋白表达的影响从而探讨基因治疗与放疗作用之间 协同作用的机制。 方法:首先在370C、5%C02、20%02和95%湿度条件 下的湿润恒温培养箱中培养人喉鳞状细胞癌Hep.2细胞,取 对数生长期细胞,分别用于以下实验: 1.倒置荧光显微镜下观察stat3ASODN转染、60Co放疗 及ASODN转染+60Co放疗作用后Hep.2细胞细胞形态学改 变。 2.结晶紫法检测不同浓度stat3ASODN+60Co放疗作用 后Hep一2细胞增殖抑制率。 3.台盼蓝排除实验计数不同条件下细胞死亡率。 4.流式细胞术检测5Gy60Co放疗作用前后及200nmol/1、 stat3ASODN、stat3 SODN转染前后Hep.2细胞的stat3、P.stat3 蛋白表达对细胞周期相关蛋白cyclinDl、p21、cdk4表达的 影响及其与细胞抑制率的关系。 5.流式细胞学检测不同浓度反义寡核苷酸转染联合定 量放疗对Hep-2细胞细胞周期及stat3、p-stat3、yclinDl、p21、 cdk4蛋白表达的影响。 结果: 中文摘要1.stat3AsoDN+5Gy60co放疗联合作用后细胞形态与单 中文摘要 1.stat3AsoDN+5Gy60co放疗联合作用后细胞形态与单 纯放疗和单纯ASODN转染后细胞比较,其形态学改变更加显 著,悬浮细胞数量明显增加。 2.ASODN+放疗组对细胞增殖抑制的影响明显大于单纯 放疗和单纯ASODN转染作用。 3.单纯放疗组(5Gv)和单纯ASODN转染组(200 nmol/1) 的细胞死亡率比空白对照组增高,而转染+放疗组细胞死亡 率较单纯放疗组和单纯ASODN转染组显著增高。 4.实验结果显示:反义治疗组的stY3、P.stat3蛋白荧光 指数低于空白对照组、脂质体转染组,反义转染+放疗组比 单纯放疗组和单纯反义转染组荧光指数降低更加显著。 Pearson相关性分析结果显示stat3与P.stat3呈显著正相关 (r=O.986 p0.01)。随着stat3、P.stat3蛋白表达的降低 cyclinDl、cdk4蛋白荧光指数呈一致性降低趋势,而p21蛋 白荧光指数呈升高趋势,cdk4蛋白表达与stat3、P.stY3蛋白 表达分别成正相关(r=O.910 r=0.949 p0.05),p21蛋白表达 与stat3、P.stY3蛋白表达分别成负相关(r=一0.981严.0.917 P O.05)且p21与cdk4之间呈现一定的负相关性(r:.0.973 P O.01)。Pearson相关分析显示:细胞抑制率的变化与stat3、 P—stat3蛋白荧光指数(FI)的变化呈负相关(F.0.989 r=一0.971 p0.01)。 5.照射后细胞周期分布改变,随着反义寡核苷酸转染浓 度的增加,G0/G1期细胞的比例不断增加,同时,处于S期 的细胞数不断降低,浓度为100nmol/1、200nmol/1、400 nmol/1 时GO/G1期细胞所占比例分别为49.69%、66.00%、83.94%; S期细胞所占比例分别为42.80%、33.05%、10.30%;G2/M 中文摘要期比例变化不定。G0/G1期细胞的比例与转染浓度呈正相关, 中文摘要 期比例变化不定。G0/G1期细胞的比例与转染浓度呈正相关, 相关系数斜率为0.9479。正义寡核苷酸转染浓度在 100nmol/1、200 nmol/1时GO/Gl期细胞的比例无明显变化, 但至浓度为400 nmol

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