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- 2019-01-30 发布于上海
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stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌hep2细胞杀伤和抑制作用的分子机制耳鼻咽喉科学专业论文
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺
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丽年3月们日
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研究生签名:彳南珲 新躲刎
b恣年b Q年 1月0月
中文摘要Stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌Hep
中文摘要
Stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌Hep 细胞杀伤和抑制作用的分子机制
摘 要
目的:通过stat3反义寡核苷酸(ASODN)转染与60Co照 射喉癌Hep.2细胞株探讨对Hep.2细胞株增殖抑制、细胞周 期变化、蛋白表达的影响从而探讨基因治疗与放疗作用之间 协同作用的机制。
方法:首先在370C、5%C02、20%02和95%湿度条件 下的湿润恒温培养箱中培养人喉鳞状细胞癌Hep.2细胞,取 对数生长期细胞,分别用于以下实验:
1.倒置荧光显微镜下观察stat3ASODN转染、60Co放疗 及ASODN转染+60Co放疗作用后Hep.2细胞细胞形态学改 变。
2.结晶紫法检测不同浓度stat3ASODN+60Co放疗作用 后Hep一2细胞增殖抑制率。
3.台盼蓝排除实验计数不同条件下细胞死亡率。
4.流式细胞术检测5Gy60Co放疗作用前后及200nmol/1、 stat3ASODN、stat3 SODN转染前后Hep.2细胞的stat3、P.stat3 蛋白表达对细胞周期相关蛋白cyclinDl、p21、cdk4表达的 影响及其与细胞抑制率的关系。
5.流式细胞学检测不同浓度反义寡核苷酸转染联合定 量放疗对Hep-2细胞细胞周期及stat3、p-stat3、yclinDl、p21、 cdk4蛋白表达的影响。
结果:
中文摘要1.stat3AsoDN+5Gy60co放疗联合作用后细胞形态与单
中文摘要
1.stat3AsoDN+5Gy60co放疗联合作用后细胞形态与单 纯放疗和单纯ASODN转染后细胞比较,其形态学改变更加显 著,悬浮细胞数量明显增加。
2.ASODN+放疗组对细胞增殖抑制的影响明显大于单纯 放疗和单纯ASODN转染作用。
3.单纯放疗组(5Gv)和单纯ASODN转染组(200 nmol/1) 的细胞死亡率比空白对照组增高,而转染+放疗组细胞死亡 率较单纯放疗组和单纯ASODN转染组显著增高。
4.实验结果显示:反义治疗组的stY3、P.stat3蛋白荧光 指数低于空白对照组、脂质体转染组,反义转染+放疗组比 单纯放疗组和单纯反义转染组荧光指数降低更加显著。 Pearson相关性分析结果显示stat3与P.stat3呈显著正相关 (r=O.986 p0.01)。随着stat3、P.stat3蛋白表达的降低 cyclinDl、cdk4蛋白荧光指数呈一致性降低趋势,而p21蛋 白荧光指数呈升高趋势,cdk4蛋白表达与stat3、P.stY3蛋白 表达分别成正相关(r=O.910 r=0.949 p0.05),p21蛋白表达 与stat3、P.stY3蛋白表达分别成负相关(r=一0.981严.0.917 P
O.05)且p21与cdk4之间呈现一定的负相关性(r:.0.973 P
O.01)。Pearson相关分析显示:细胞抑制率的变化与stat3、 P—stat3蛋白荧光指数(FI)的变化呈负相关(F.0.989 r=一0.971 p0.01)。
5.照射后细胞周期分布改变,随着反义寡核苷酸转染浓
度的增加,G0/G1期细胞的比例不断增加,同时,处于S期 的细胞数不断降低,浓度为100nmol/1、200nmol/1、400 nmol/1 时GO/G1期细胞所占比例分别为49.69%、66.00%、83.94%; S期细胞所占比例分别为42.80%、33.05%、10.30%;G2/M
中文摘要期比例变化不定。G0/G1期细胞的比例与转染浓度呈正相关,
中文摘要
期比例变化不定。G0/G1期细胞的比例与转染浓度呈正相关, 相关系数斜率为0.9479。正义寡核苷酸转染浓度在 100nmol/1、200 nmol/1时GO/Gl期细胞的比例无明显变化, 但至浓度为400 nmol
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