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独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (逵!麴遗直基丝重要犍别虚塑的：奎拦亘窒)或其他教育机构的学位或证书使用 过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：障岛托签字日期：易『『年6月弓日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： 1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 一国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNⅪ《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 一(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 荫农笆 导师粹弦。 签字日期：出1年b月乡日 签字日期：劢1年6月弓日 斑马鱼Properdin基因的鉴定、表达和功能特性 斑马鱼Properdin基因的鉴定、表达和功能特性 摘 要 Properdin蛋白即P因子，是补体替代激活途径中的正向调节因子，起着稳 定替代途径中C3转化酶(C3bBb)的作用。为了进一步阐明Properdin的结构和功 能之间的关系，探索Properdin与C3b及B因子的结合位点，我们从斑马鱼中克 隆并表达了该基因，以鉴定其功能特性。 Properdin基因的开放阅读框全长为13 14bp，编码一条含有437个氨基酸的 多肽，其前20位氨基酸为信号肽，预测分子量大小为48．2KDa，也是由6个I 型凝血酶敏感蛋白重复序列构成。l?roperdin成熟蛋白中有40个半胱氨酸，预测 有15个二硫键形成，31和58位处氨基酸可能为二个潜在的糖基化位点。对不 同物种间Properdin的蛋白序列建进化树分析，结果显示斑马鱼Properdin蛋白和 其它硬骨鱼Properdin聚成一簇。不同物种的Properdin蛋白序列及结构域进行多 序列比对，发现斑马鱼properdin蛋白中存在保守的氨基酸基序WXXWXXW和 RXR。与人、鼠、爪蟾、虹鳟(c邱1、cfp2、efp3)的比较发现，同源性分别为42％、 41％、43％、48％、48％和49％。实时荧光定量PCR结果显示：斑马鱼Properdin 直到胚胎发育到30％下包时有母源性表达，且表达量随发育进行逐渐降低，但从 20体节开始，合子基因开始表达。不同组织的实时荧光定量PCR结果表明，肝 脏、肠、心脏、脑、眼睛、精巢、卵巢等组织中均有表达，在肠、鳍、肌肉的表 达量相对较低，精巢、肝脏、眼睛、心脏、鳍的表达量较高，其中精巢中表达最 多。 综上所述，斑马鱼Properdin的结构域特征与哺乳动物中该蛋白的结构域特 征一样，与其在系统中的发育地位是相符的。预测的一个糖基化位点位于Cys45 和Cys63之间，而这两个半胱氨酸预测会形成二硫键，因此推测此二硫键为与糖 类的结合位点。Properdin有母源性表达，可能提示其在发育早期起作用。不同 物种问Properdin表达部位不同是否提示其功能有差异，还有待于深入研究。这 是关于斑马鱼中Properdin基因表达及其表达模式的首次报道，我们已经纯化得 到了Properdin重组蛋白，为以后利用免疫结合等生物学技术探索Properdin蛋白 的结构、功能及作用机制奠定了基础。深入了解其功能，有助于我们阐明人类补 体缺乏病理机制，也促进我们对鱼类补体系统的功能有更深入的理解。 体缺乏病理机制，也促进我们对鱼类补体系统的功能有更深入的理解。 关键词： 替代途径r补体；备解素；P因子；凝血酶敏感蛋白 Identification，expression Identification，expression and functional characterization of prol?rdin from zebrafize brall Sla Abst ract Properdin，also known as P factor,is all upregulator of the alternative complement pathway and acts by stabilizing the alternative pmhway convertase (C3bBb)．To elucidate the