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动脉硬化相关基因表达的调节——————～——— 动脉硬化相关基因表达的调节 ——————～——— 一一 一一一—一 摘要 动脉硬化是一种炎性病变过程，常伴有血浆低密度脂蛋白 (LDL)．胆固醇水平的升高。单核／巨噬细胞通过积聚胆固醇 酯，继而形成泡沫细胞而在动脉硬化病变的形成中起着重要的作 用。对动脉硬化相关基因的研究，如：过氧化物体增殖剂激活的 受体y(PPARy)，CD36，和脂肪细胞脂肪酸结合蛋白 (aP2)，其目的是为了更好地理解动脉硬化的病理形成过程。 PPARy是一个与多种生理病理过程有关的核转录因子。在 单核／巨噬细胞，PPARy在CD36结合和内吞氧化的LDL(OxLDL) 的过程中，对CD36表达的调节起着重要的作用。OxLDL，反过 来，通过激活PP创时又可以上调c。36的表这州基个正反馈环路 使得细胞内不断增加的脂质积累持续进行下去，最终导致泡沫细 胞的形成。在脂肪细胞，PPAR／与另一个转录因子CCAAT／增 强子结合蛋白0c(C／EBPct)相互作用、相互配合，诱导脂肪细胞 分化及其靶基因(如，CD36和aP2)的激活。aP2在脂肪细胞中 1 高度表达，并且充当细胞内脂肪酸代谢和转运的往返运载工具。aP2也在单核／巨噬细胞中表达，并且它的缺失对高胆固醇血症 高度表达，并且充当细胞内脂肪酸代谢和转运的往返运载工具。 aP2也在单核／巨噬细胞中表达，并且它的缺失对高胆固醇血症 (apoE／-)鼠有明显的抗动脉硬化作用oy 我们首先观察了“adipogenic cocktail”对巨噬细胞aP2表达 的作用。adipogenic cocktail，包括异丁基甲基黄嘌呤 (IBMX)，胰岛素(Ins)，和地塞米松(Dex)这三种脂肪细 胞生成诱导剂，常规用于体外诱导脂肪细胞分佬；~f用adipogenic t cocktail处理J774巨噬细胞4天，可以明显诱导aP2 mRNA的表 达。在它的三个组成成份中：Dex对诱导aP2基因的表达是必不 可少的，Ins可以协同增强Dex的作用，而IBMX却拮抗Dex或 Dex和Ins对aP2的诱导作用(IBMX的这一作用与其在脂肪细 胞分化过程中的作用完全相反)。与aP2 mRMA的变化相一 致，Dex也可使aP2蛋白的表达增加，并伴有细胞对14C．油酸摄 取的加强。CD36的表达(和P2相同，在脂肪细胞中均可被 adipogenic cocktail诱导增加)在巨噬细胞中与aP2的变化相反。 另外，在巨噬细胞中，这些脂肪细胞生成诱导剂对PPARy和 2 C／EBPct的调节与aP2的变化均不一致。以上这些区别提示， C／EBPct的调节与aP2的变化均不一致。以上这些区别提示， adipogenic cocktail及其组成成份对巨噬细胞aP2的调节可能并不 依赖于PPART／C／EBPct信号传导通路。 其次，我们又对三苯氧胺(Tam)在人的单核／巨噬细胞中， 对CD36表达的作用进行了评价。Tam是一种常规使用治疗乳腺 癌的抗雌激素药。除此作用外，它还显示具有与雌激素相互作用 无关的心血管保护作用，其作用机制尚不清楚。我们观察到Tam 及其活性代谢产物羟．三苯氧胺(OH．Tam)不但可以降低THP．1 单核细胞CD36蛋白表达水平，还可使OxLDL及PGJ2诱导的 CD36表达水平下调。同时，通过RT．PCR和Northern blot还可 观察到与蛋白变化相一致的CD36 mRNA水平的下降。对其作用 机制的研究显示，Tam和OH·Tam均可下调PPAR：y的表达，并 可同时增加由磷酸化．p44／42有丝分裂原激活的蛋白(MAP)激 酶介导的PP剐时磷酸化丫 最后，为了更好地理解PPART，我们观察了内毒素脂多糖 (LPS)对脂肪细胞(PP刖脚在该细胞中最为丰富，且其功能已 3 被很好地阐述)PPARy的影响。用LPS处理体外培养的3T3．L1 被很好地阐述)PPARy的影响。用LPS处理体外培养的3T3．L1 脂肪细胞，可降低PPAR?mRNA及蛋白的表达。另外，LPS还 可通过激活MAP激酶使PPAR7的磷酸化增加。与PPAR7的变化 相一致，PPAR?的靶基因aP2和CD36的表达也明显下降。对于 正向脂肪细胞分化的3T3-L1细胞，LPS可抑制PPARy蛋白表达 的诱导，降低脂肪细胞生成的速度：细胞内甘油三酯水平及油红 O染色阳性率均明显地低于正常分化的细胞。 心之，通过我们的实验可得到以下结论：1)脂肪细胞生成诱 导剂能够调节巨噬细胞aP2的表达，其机制并不依赖于PPAR?和 ／或C／EBPa信号传导路；2)三苯氧胺通过下调PPAR7表达和激 活MAP激酶而使PPAR7磷酸化来降低单核／巨噬细胞CD36表 达；3)LPS负性调节PPA