阿尔茨海默病模型大鼠线粒体氧化损伤及何首乌对其作用机制的分析神经病学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 背景和目的 阿尔茨海默病(Mzheimer disease，AD)是一种以进行性记忆缺 失和痴呆为临床特点的大脑退行性疾病。现已研究表明：机体内氧自 由基产生增加、清除氧自由基能力下降在AD的发生发展中起重要作 用；氧自由基主要来源于线粒体的氧化磷酸化，因此，线粒体最易受 氧自由基的氧化损伤。AD时脑细胞的能量代谢是降低的，是否与其 线粒体的氧化损伤有关，迄今国内尚未见报道。祖国医学认为何首乌 具有“益智、延年益寿”作用；现代医学认为何首乌具有抗氧化损伤 作用，但对其如何发挥抗氧化损伤作用国内外均未见报道。本研究课 题通过观察AD模型大鼠海马线粒体结构和功能的变化以及何首乌对 它们的影响，探讨AD的发生与线粒体氧化损伤的关系和何首乌抗氧 化损伤作用的分子机制，为进一步阐明AD的发生机制和寻找治疗AD 的有效药物提供理论基础。 方法 将经Y一迷宫实验筛选的60只大鼠随机分为对照组、模型组和何 首乌组，建立实验动物模型。40天后用Y一迷宫实验检测各组大鼠学 会躲避电刺激所需的次数；行HE染色观察海马CAl区神经元形态； 电镜观察海马CAl区的线粒体的超微结构；荧光分光光度计检测海马 线粒体膜的流动性；紫外分光光度计测定海马组织SOD活性、MDA含 量和COX活性；高效液相色谱仪测定海马线粒体ATP、ADP、AMP的含 量；聚合酶链式反应扩增海马mtDNA的COX II、COXlII基因并进行其 DNA序列分析。 结果 1．模型组大鼠学会躲避电刺激所需的次数均明显多于对照组 (P0．05)和何首乌组(PO．05)，具有统计学意义。2．AD模型组大鼠海马CAl神经元数目减少，细胞排列不整齐， (P0．05)和何首乌组(PO．05)，具有统计学意义。 2．AD模型组大鼠海马CAl神经元数目减少，细胞排列不整齐， CAl区超微结构损害以线粒体较明显。何首乌组较模型组大鼠海马 CAl区神经元数目增多，细胞排列较整齐，CAl区超微结构损害较轻。 3．模型组大鼠海马组织SOD活性均低于对照组(PO．01)和何首 乌组(P0．01)；模型组大鼠海马组织MDA含量均高于对照组(P(0．01) 和何首乌组(PO．01)；模型组大鼠海马线粒体膜粘滞系数均高于对 照组(PO．01)和何首乌组(P0。05)；均有统计学意义。 4．学习记忆能力与SOD活性呈正相关，与MDA含量成负相关。海 马组织SOD活性与线粒体膜粘滞系数呈负相关，MDA的含量与线粒体 膜粘滞系数呈正相关。 5．模型组大鼠海马线粒体COX活性均低于对照组(P0．01)和何 首乌组(PO．01)；能荷也低于对照组(P0．05)和何首乌组(PO．05)； 均有统计学意义。 6．大鼠海马线粒体能荷与COX活性、海马组织SOD活性与COX活 性、大鼠的学习记忆能力与海马线粒体能荷均呈正相关。 7．COXII基因序列分析结果：三组大鼠mtDNA上7026位置均发生 碱基转换T—c，经与COX II的氨基酸序列比较为同义突变；模型组还 检测出突变基因23处，碱基替换19处(其中碱基转换lO处，碱基 颠换9处)中有7处为同义突变、8处为错义突变；基因插入2处， 基因缺失2处；对照组和何首乌组各检出三处同义突变。 8．COXIII基因序列分析结果：对照组共检测出7处碱基替换，其 中有3处为同义突变，3处为错义突变，l处为无义突变。模型组共 检测出突变基因46处，碱基替换35处(其中碱基转换20处，碱基 颠换15处)中有10处为同义突变、22处为错义突变、3处为无义突 变；基因插入9处，基因缺失2处。何首乌组共检出突变基因12处， Ⅱ 碱基替换9处(其中碱基转换3处，碱基颠换6处)中2处为同义突变，6处为错义突变，l处为无义突；基因插入3处。 碱基替换9处(其中碱基转换3处，碱基颠换6处)中2处为同义突 变，6处为错义突变，l处为无义突；基因插入3处。 结论 1．本实验采用向大鼠海马内注射AB卜40建立的AD模型重复性 好，稳定可靠。何首乌可提高AD大鼠的学习记忆能力，减轻AD大鼠 海马神经元及其线粒体的损害。 2．AD大鼠海马组织SOD活性降低、MDA含量增高、线粒体膜流动 性下降：线粒体膜的流动性与海马组织SOD活性和MDA含量有相关关 系。何首乌可能通过提高SOD活性产生抗氧化损伤作用来维持线粒体 膜合适的流动性，进而提高AD大鼠的学习记忆能力。 3．AD大鼠海马线粒体COX活性、能荷均降低。AD大鼠海马线粒 体能荷与COX活性、COX活性与SOD活性、大鼠的学习记忆能力与海 马线粒体能荷均呈正相关。何首乌可通过抗氧化损伤作用维持AD大 鼠海马线粒体COX活性提高AD大鼠海马的能量代谢。 4．AD大鼠海马COXII、COXlII基因易发生突变，遗传密码的改变 导致COX II和COXI