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人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用免疫学专业论文
河北医科大学
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研究生签名:历易缎东 导师签章;孑a、j我
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万方数据
目
目 录
中文摘要 1
英文摘要 4
英文缩写 8
研究论文人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用
前言日U舌 99
材料与方法 10
结果 14
附图 1 7
附表 ..22
讨论 ..26
结论 .。28
参考文献 ..28
综述生长激素释放激素类似物的研究进展 31
致谢 40
个人简历 41
万方数据
中文摘要人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用
中文摘要
人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用
摘 要
目的:人生长激素释放激素(bGⅢIH)由下丘脑分泌,促进垂体合成
和释放人生长激素(hGH)。前原蛋(jhGHRH(1.107/8)的成熟由一系列蛋白 水解加工步骤,最终的成熟形式是hGmm(1.44扑眦2,hGHRH(1.37)OH和 hGHRH(1-40)OH,但其半衰期短和活性低是主要限制。最近研究发现,
hGHRH(1—44)分子的N.端1T弦一Pr0.1Pro.或1Pro.延伸或代换,和C端GGC延 伸的同源二聚体意外表现出比hGHRH(1.44)NH2更高的生长激素释放活性。 本论文主要研究四种新型hGHRH二聚体结构和生物活性之间的关系,为后 续进一步动物体内实验研究奠定基础。
方法:
1 GⅢm类似物单体的化学合成和鉴定 以固相多肽合成技术合成新型N端和(或)C端改构的GHRH单体肽,
其分子量用ESI MS进行鉴定,纯度用C18.反相印?LC进行鉴定。
2 GHRH二聚体的形成和鉴定
GHR单体肽在pH=11.5的氨水溶液中,37。C保温60小时后形成二 聚体肽,冻干后用肽电泳进行纯度鉴定。
3 GHRH二聚体肽刺激垂体激素分泌的体外活性分析
S.D雌鼠12:12小时明暗交替饲养,饲养温度26±I。C。大鼠经断颈处 死,在30分钟内摘取全部脑垂体。用灭菌的lactated Ringer’s buffer(LRB) 冲洗后,垂体立即放到内有l ml LRB的玻璃管中,37℃保温。玻璃管总保 温5 h,每1小时后,轻轻吸出试管里面的缓冲液,同时加入1毫升新鲜的
缓冲液。从第3小时保温魄丘埘开始,连续加入1.927州hGHRH活性多
肽。收集的标本用ELISA测定大鼠垂体激素GH、ACTH、LH和PRL。 4大鼠垂体生长激素释放抑制分析 根据垂体GH释放活性试验(B,巳厶J厶,功,在点r毛保温中,分别添加
0.482或1.927 la M的生长激素抑制激素(GHIH)于含有1.927 u M GHRH
二聚体的管中。无肽B保温做空白和S肽做标准对照。大鼠垂体GH水平
用们H ELISA试剂盒测定。
万方数据
中文摘要5
中文摘要
5 GHRH二聚体肽体外受体结合反应
取30只S.D雌鼠的新鲜垂体,匀浆缓冲液研磨重悬,Bradford法测蛋 白浓度。在测试中,每孔分别加入1009l垂体匀浆液,5种不同浓度的荧光 标记二聚体肽和对应的非标记GHRH二聚体,总体积3009l。每个测试重复 2次,用荧光检测仪在490/525 nm波长下测荧光值。
6大鼠垂体组织荧光染色分析
福尔马林固定S.D大鼠垂体组织切片染色,染色方法如下:玻片浸泡在 HEPES缓冲液3次,每次5分钟。在组织切片上滴加200山含有76+1荧光 强度的FITC-GHRH二聚体的H】巳PEs缓冲液,37。C下孵育1小时。用HEPES 缓冲液洗涤两次后,在切片上滴加DAPI水溶液(O.01克/毫升),37。C孵育 15分钟。将切片洗涤后用荧光封固剂封片。此染色过程在暗环境中进行。
结果:
l hG瑚iH类似物的纯度和分子质量 反相高效液相色谱法分析hGHRH的纯度均大于95%,电喷雾质谱仪法
分析肽的分子质量与实际分子质量一致。聚丙烯酰胺凝胶电泳法
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