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人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用免疫学专业论文

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学, 研究生签名: 喜娄差,利警知识产一所 试验材料、原始数据、 有。否则,承担相应法 律责任。 ..∥簟.窆。.爹:蠡。‘≥魏 慧一。屯 0 }. .导师签章:弓峡三交学院领导精; 麓。i0。:囊蓐厂凡.彳日’ 1L~ I_ ‰:‘、,j,铝n-一 ‘‰o 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果, 除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经 发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人 独立撰写,文责自负。 名 研究生签名:历易缎东 导师签章;孑a、j我 力,了年J月乃日 万方数据 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用 前言日U舌 99 材料与方法 10 结果 14 附图 1 7 附表 ..22 讨论 ..26 结论 .。28 参考文献 ..28 综述生长激素释放激素类似物的研究进展 31 致谢 40 个人简历 41 万方数据 中文摘要人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用 中文摘要 人生长激素释放激素类似肽二聚体的生物学作用 摘 要 目的:人生长激素释放激素(bGⅢIH)由下丘脑分泌,促进垂体合成 和释放人生长激素(hGH)。前原蛋(jhGHRH(1.107/8)的成熟由一系列蛋白 水解加工步骤,最终的成熟形式是hGmm(1.44扑眦2,hGHRH(1.37)OH和 hGHRH(1-40)OH,但其半衰期短和活性低是主要限制。最近研究发现, hGHRH(1—44)分子的N.端1T弦一Pr0.1Pro.或1Pro.延伸或代换,和C端GGC延 伸的同源二聚体意外表现出比hGHRH(1.44)NH2更高的生长激素释放活性。 本论文主要研究四种新型hGHRH二聚体结构和生物活性之间的关系,为后 续进一步动物体内实验研究奠定基础。 方法: 1 GⅢm类似物单体的化学合成和鉴定 以固相多肽合成技术合成新型N端和(或)C端改构的GHRH单体肽, 其分子量用ESI MS进行鉴定,纯度用C18.反相印?LC进行鉴定。 2 GHRH二聚体的形成和鉴定 GHR单体肽在pH=11.5的氨水溶液中,37。C保温60小时后形成二 聚体肽,冻干后用肽电泳进行纯度鉴定。 3 GHRH二聚体肽刺激垂体激素分泌的体外活性分析 S.D雌鼠12:12小时明暗交替饲养,饲养温度26±I。C。大鼠经断颈处 死,在30分钟内摘取全部脑垂体。用灭菌的lactated Ringer’s buffer(LRB) 冲洗后,垂体立即放到内有l ml LRB的玻璃管中,37℃保温。玻璃管总保 温5 h,每1小时后,轻轻吸出试管里面的缓冲液,同时加入1毫升新鲜的 缓冲液。从第3小时保温魄丘埘开始,连续加入1.927州hGHRH活性多 肽。收集的标本用ELISA测定大鼠垂体激素GH、ACTH、LH和PRL。 4大鼠垂体生长激素释放抑制分析 根据垂体GH释放活性试验(B,巳厶J厶,功,在点r毛保温中,分别添加 0.482或1.927 la M的生长激素抑制激素(GHIH)于含有1.927 u M GHRH 二聚体的管中。无肽B保温做空白和S肽做标准对照。大鼠垂体GH水平 用们H ELISA试剂盒测定。 万方数据 中文摘要5 中文摘要 5 GHRH二聚体肽体外受体结合反应 取30只S.D雌鼠的新鲜垂体,匀浆缓冲液研磨重悬,Bradford法测蛋 白浓度。在测试中,每孔分别加入1009l垂体匀浆液,5种不同浓度的荧光 标记二聚体肽和对应的非标记GHRH二聚体,总体积3009l。每个测试重复 2次,用荧光检测仪在490/525 nm波长下测荧光值。 6大鼠垂体组织荧光染色分析 福尔马林固定S.D大鼠垂体组织切片染色,染色方法如下:玻片浸泡在 HEPES缓冲液3次,每次5分钟。在组织切片上滴加200山含有76+1荧光 强度的FITC-GHRH二聚体的H】巳PEs缓冲液,37。C下孵育1小时。用HEPES 缓冲液洗涤两次后,在切片上滴加DAPI水溶液(O.01克/毫升),37。C孵育 15分钟。将切片洗涤后用荧光封固剂封片。此染色过程在暗环境中进行。 结果: l hG瑚iH类似物的纯度和分子质量 反相高效液相色谱法分析hGHRH的纯度均大于95%,电喷雾质谱仪法 分析肽的分子质量与实际分子质量一致。聚丙烯酰胺凝胶电泳法

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