利用SIE转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细胞介-药物分析杂志.PDFVIP

药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2018,38(10) ·1755· 利用 SIE 转录活性荧光素酶报告基因系统检测 白细胞介素 6 受体拮抗剂的生物活性 王自强 王灿 董闪闪 邵泓 陈钢* ， ， ， ， （上海市食品药品检验所，上海 201203 ） 摘要　目的：利用sis 诱导元素（sis-inducible element ，SIE ）转录活性荧光素酶报告基因系统检测白细 胞介素6 （IL-6 ）受体拮抗剂的生物活性。方法：采用脂质体转染法将含有SIE 转录因子组件及荧光素 酶报告基因的质粒pGL 4.47 转入293T 细胞，并通过潮霉素压力筛选获得稳定转染细胞株。加入IL-6 激活稳转细胞株中的荧光素酶报告基因，构建SIE 转录活性荧光素酶报告基因系统，并进一步建立基 于此系统的IL-6 受体拮抗剂药物的生物学活性定量检测方法。结果：IL-6 可激活293T-SIE 稳定转染 细胞中的荧光素酶报告基因，且具有量效关系。对此系统检测IL-6 受体拮抗剂药物的生物学活性进 行方法学验证，显示本检测方法准确性及重复性均较好。结论：建立了一种基于荧光素酶报告基因系 统的IL-6 受体拮抗剂药物生物学活性检测方法，与现有方法相比，具有耗时少、准确性高、重复性好的 优势。 关键词：IL-6 受体拮抗剂；荧光素酶报告基因；稳定转染细胞；生物学活性；方法验证 中图分类号：R 917　　　文献标识码：A　　　文章编号：0254-1793 （2018 ）10-1755-06 doi ：10.16155/j.0254-1793.2018.10.13 Detection of biological activity of interleukin-6 receptor antagonist by SIE transcriptionally active luciferase reporter gene system * WANG Zi-qiang ，WANG Can ，DONG Shan-shan ，SHAO Hong ，CHEN Gang （Shanghai Institute for Food and Drug Control ，Shanghai 201203 ，China ） Abstract　Objective ：To determine bioactivity of interleukin-6 （IL-6 ）receptor antagonists using sis-inducible element （SIE ）transcriptionally active luciferase reporter gene system．Methods ：Plasmid pGL 4.47 containing the SIE transcription factor and the luciferase reporter gene was transferred into 293T cells by liposome transfection ， and the stable transfected cell line （293T-SIE ）was obtained by hygromycin pressure screening．Being activated by IL-6 ，the luciferase reporter gene system was constructed and the bioactivity detection method of IL-6 receptor antagonist based on this system was further estab