产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定生物化工专业论文.docxVIP

＼] ＼] 摘要石杉碱q3(Hupcrzine 摘要 石杉碱q3(Hupcrzine A)是从药用蕨类植物蛇足石杉[Huperzia se玎am(Thunb． eX Murray)Trev．】中率先分离得到的一种天然新型石松生物碱(Lycopodium alkaloids)，具有高效、高选择性的乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，ACHE)抑 制活性，是目前治疗阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease，简称AD)最具前景的生 物碱类药物。迄今，由于化学合成、人工栽培及细胞培养等生产技术一直无法突 破，石杉碱甲仅能从野生蛇足石杉等石松属植物中提取。但蛇足石杉等石松植物 石杉碱甲含量低、生长缓慢、野生资源十分有限，存在原料短缺和环境破坏等严 重问题。因此，要从根本上解决石杉碱甲的药源问题，寻求新的有效途径势在必 行。 近年来的研究表明植物内生真菌可产生与宿主植物相同或相似的生物活性 ．物质。迄今，国内外已有分离获得产石杉碱甲内生真菌的报道，使得利用内生真 菌生产药物活性化合物成为一种可供选择的有效途径。鉴于药用植物内生真菌的 重要生物活性，本研究以江西省中科院庐山植物园野生蛇足石杉为材料，对其开 展内生真菌的分离筛选j以期从中勘探获得高效抑制AChE活性和产石杉碱甲的 ◆ 内生真菌，为利用内生真菌发酵实现工业化生产石杉碱甲奠定基础。 本研究从蛇足石杉组织中共计分离获得127株内生真菌，分属于Penicillium sp．、Aspergillus sp．、Cladosporium sp．、CoHem护ichum sp．、Chaunopycnis sp．、 Acremonium sp．、Capronia sp．、Mortierella sp．、Botrytis sp．、Coniothyrium sp．、 Paraphaeosphaeria sp．、Leptosphaeria sp．、Shiraia sp．、Alternaria sp．和Podospora sp．等19个属，包括10个可能的潜在新种和4个潜在新属。Penicillium sp．、 Podospora sp．和Aspergillus sp．为优势类群，相对频率分别为15．7％、11．8％和 11．0％。根、茎、叶中内生真菌的分布存在一定的组织差异性，茎中内生真菌的 分离率、定殖率和多样性指数最高，叶中次之，根中最少。 体外AChE抑制活性检测结果显示，共有15个属的39株内生真菌显示出 ● AChE抑制活性，其中11株有显著的抑制活性，其抑制率范围在60．2％96．5％， 且主要是从蛇足石杉叶部分离得到(7株)。 TLC、Uv-HPLC、ESI．MS分析结果表明，共有来自Penicillium sp．、 Acremonium sp．、Aspergillus sp．、Shiraia sp．等7个属的9株内生真菌产石杉碱甲， 其中以菌株Aspergillus Ilavus LF40和Cladosporium cladosporioides LF70的产量 较高，含量分别为80．1I．tg／gdcw和56．84}tg／gdcw。从蛇足石杉叶片组织分离获得 产石杉碱甲内生真菌的数量最多，有7株，茎和根中各仅有l株，显示出产石杉 碱甲蛇足石杉内生真菌分布的组织差异。 碱甲蛇足石杉内生真菌分布的组织差异。 关键词：蛇足石杉；内生真菌；石杉碱甲；乙酰胆碱酯酶；抑制活性 ◆ AbstractHuperzine Abstract Huperzine A(HupA)，a lycopodium alkaloid isolated originally from medicinal pteridophyta Huperzia serrata(Thunb．ex Murray)Trev．，has attracted intense attention since its marked anticholinesterase(ACHE)activity and is becoming all ● important compound in drugs for Alzheimer’S disease(AD)treatment．Because of no successful commercial chemical synthesis and H．serrata cultivation and cell culture has been reported in producing HupA，thus far,most of the HupA is sourced from Chinese club moss H．serrata．However,H．se