肠杆菌科临床耐药株中iscr1元件与耐药基因水平传播的关系研究临床医学;内科学传染病专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 插入序列共同区域(insertion sequence common region，ISCR)是继接合性 质粒、整合子、转座子之后的一种新型的的高效的耐药基因水平传播媒介。肠 杆菌科细菌中发现较多的是位于复合l类整合子中的ISCRl元件，其下游可连 接多种耐药基因：如A类和C类13．内酰胺酶基因、喹诺酮耐药基因qnr、氨基 糖苷类耐药基因almA和rmtB、甲氧苄啶耐药基因和氯霉素耐药基因等。 目的了解2009年．2010年天津市某三甲医院104株肠杆菌科临床耐药株的耐药 表型以及ISCRl元件的分布；研究ISCRl阳性肠杆菌科临床株质粒介导的耐药 机制，及ISCRl元件下游的基因环境，以探讨ISCRl元件在细菌耐药性播散中 的作用。 方法自2009年1月至2010年7月从天津市某三甲医院收集104株肠杆菌科临 床耐药株；采用微量肉汤稀释法检测104株细菌对12种常用抗菌药物的MIC值。 PCR及DNA序列分析检测ISCRl元件中的orfSl3基因。双纸片扩散法进行 ESBLs确证试验、三维试验筛选AmpC酶；PCR、多重PCR、PCR-SSCP及DNA 序列分析检测CTX-M．ESBLs基因l组和9组、SHV、TEM、ampC、qnrA、qnrB、 rmtB及armA基因。PCR-mapping及DNA序列分析检测ISCRl下游基因环境。 结果 l、104株肠杆菌科临床耐药株对12种常用抗菌药物CPR、CFP、CRO、CTX、 GM、PPT、CAZ、CIP、OFX、LEV、AMK、CPS耐药率分别为：83．65％、80．77％、 78．85％、73．08％、67．31％、66．35％、64．42％、64．42％、57．69％、46．15％、26．92％、 22．12％。多重耐药株共58株，多重耐药株比率55．77％(58／104)。 2、104株肠杆菌科临床耐药株中17株细菌(16．35％)PCR扩增ISCRl元件的 off513基因阳性，序列分析证实为orf513基因。其中大肠埃希菌5株(EA291、 EA705、EA791、EA907、EAl904)，克雷伯菌属4株(K382、K386、K1231、 K2414)，阴沟肠杆菌5株(EC347、EC553、ECl322、ECl342、EC2394)，1株 产气肠杆菌(E391)、1株弗劳地枸橼酸杆菌(CF351)及1株吉戈菲肠杆菌 (JE982)。 3、17株ISCRl阳性菌株对10种抗菌药物耐药率高于87株ISCRl阴性菌株。 17株ISCRl阳性菌株中多重耐药菌株比率为70．59％(12／17)高于87株ISCRl 阴性菌株多重耐药菌株比率52．87％(46／87)。 天津医科大学硕士学位论文4、17株ISCRl阳性肠杆菌科临床耐药株中EA791、K386、EC553、ECl322、 天津医科大学硕士学位论文 4、17株ISCRl阳性肠杆菌科临床耐药株中EA791、K386、EC553、ECl322、 ECl342等5株细菌ESBLs确证试验阳性。菌株EA791、K386、EC553等3株 细菌携带CTX．M．1组ESBLs基因；未扩增出CTX-M．9组ESBLs基因；ECl322、 ECl342等2株细菌携带SHV-12基因；所有5株细菌PCR扩增TEM基因均阳 性，经PCR．SSCP分析均为TEM．1(广谱B-内酰胺酶)。三维试验筛选AmpC 酶仅菌株EA291为阳性结果，多重PCR扩增证实为DHA型AmpC酶基因。 5、17株ISCRI阳性肠杆菌科临床耐药株中EC2394、CF351等2株细菌携带喹 诺酮耐药基因qnrA；K1231、EC347、ECl322、ECl342等4株细菌携带喹诺酮 耐药基因qnrB；K123 1、ECl322、ECl342等3株细菌对喹诺酮类抗菌药物敏感， 余3株细菌表现为耐药。菌株K386携带氨基糖苷类耐药基因rmtB，EAl904、 K382、K386、EC553、JE982等5株细菌携带氨基糖苷类耐药基因annA。 6、PCR-mapping扩增及序列分析17株ISCRl阳性肠杆菌科临床耐药株中ISCRl 元件下游的基因环境，ECl322、ECl342等2株细菌ISCRl元件下游连接喹诺 酮耐药基因qnrB2：EC2394、CF35 1等2株细菌ISCRl元件下游连接喹诺酮耐 药基因qnrA； K1231、EC347等2株细菌ISCRI元件下游连接喹诺酮耐药基 因qnrB6；菌株JE982的ISCRl元件下游连接氨基糖苷类耐药基因armA。余10 杵细菌检测结果阴性。 结论 l、本地区肠杆菌科临床耐药株中存在ISCRl元件的分布。ISCRl阳性菌株对多 种抗菌药