ido抑制小鼠小肠移植急性排斥反应的实验研究中西医结合临床外科专业论文.docxVIP

天津医科大学博士研究生学位论文 天津医科大学博士研究生学位论文 塑矍 导小鼠脾脏DC的活性IDO表达增加 从而减弱脾脏DC对同种T淋巴细胞 增殖的泰U激能力。 第二部分小鼠异位节段性小肠移植模型的建立 目的：建立稳定的小鼠异位节段性小肠移植模型以便进一步行体内实验。 方法：通过显微外科技术分两阶段建立该动物模型。第一阶段为模型制作训 练阶段，第二阶段为定向实验阶段。结果：第二阶段施行手术108次，手术 成功率(72122％)较第一阶段(27，05％)明显提高(PO．01)。第二阶段中，移 植肠灌注／保存不良是导致受体死亡的主要原因，血管吻台失误所占比率较第 ～阶段明显下降。第二阶段移植肠冷、热缺血时间及供、受体手术时间等较 第一阶段观显缩短(PO，01)。结论：保证供肠质量和血管吻合质量是手术残 功的关键。在血管灌注前进行肠腔灌注及建立有效的出血预防措施尤其重要， 第三部分IDO高表达DC对小鼠小肠移植排斥反应的抑制作用 目的：研究高表达IDO的供体DC对移植排斥反应的作用及机理以及IDO 在移植肠局部的表达情况及作用。方法：将IFN．Y诱导的供体脾脏DC(高 表达IDO，该组简称为诱导DC组)及未受IFN。y诱导的供体脾脏DC(低 表达IDO，该组简称为DC组)分别于术前输注异系受体小鼠，并设立同系 组、异系未处理组和异系CsA治疗组作为对照。观察移植肠及受体存活时间， 术后6天获敏移植肠行病理学检查、RT-PCR硷测IL-2、IFN—Y、IL，10和IDO mRNA的表达水平、Western Blot检测IDO蛋白的表达水平。结果：与异系 未处理组和DC组相比，诱导DC组移植肠平均存活时间显著性延长，病理 分级、IL一2及IFN．Y mRNA表达水平显著性降低，IL一10、IDOmRNA及IDO 蛋白表达水平显著性增高。与CsA治疗组比较，诱导DC组移植肠平均存活 时间显著性缩短，IL-2mR．NA表达水平显著性增高，IL．10mRNA表达水平显 著性降低，其它指标无显著性差异。移植肠病理分级与／DO表达水平及Th2 细胞因子表达水平呈明显负相关(尸o．or)，与Thl细胞因子表达水平呈明显 正相关(PO．01)。结论：高表达[DO的供体DC术前输注具有抑制小鼠小肠 2 茎笙垦型苎=兰壁圭婴窒兰兰竺堡苎 茎笙垦型苎=兰壁圭婴窒兰兰竺堡苎 塑矍 移植排斥反应的作用。该抑制作用与其诱导移植肠局部IDO表达及nl细胞 分化由Thl向Th2偏移有关。 第四部分IDO高表达DC联合青藤碱对小鼠小肠移植排斥反应 的抑制作用 目的：研究高表达IDO的供体DC术前输注联合中药青藤碱治疗对移植 排斥反应的作用及机理。方法：将输注诱导DC的受体术后联合中药青藤碱 治疗(该组简称为联合治疗组)，并设立未处理组、诱导DC治疗组、青藤碱治 疗组和CsA治疗组作为对照。观察移植肠及受体存活时间，术后6天获取移 植肠行病理学检查、RT-PCR检测IL一2、IFN-Y、IL-10和IDO mRNA的表达 水平、Western Blot检测IDO蛋白的表达水平。结果：与未处理组相比，青 藤碱治疗组移植肠平均存活时间延长，病理学分级、IFN-r mRNA表达水平 降低，但均无显著性差异；而IL．2mRNA表达水平显著性降低，IL一10mRNA 表达水平显著性增高。与未处理组和青藤碱组相比，联合治疗组移植肠平均 存活时间显著性延长，病理学分级、IL．2、IFN．Y mRNA表达水平显著性降 低，IL．10、IDOmRNA及IDO蛋白表达水平显著性增高。与诱导DC治疗组 相比，联合治疗组移植肠平均存活时间显著性延长，IL-2 mR_NA表达水平显 著性降低，IDOmRNA及IDO蛋白表达水平显著性增高，病理学分级、fiN- 丫和IL．10mRNA表达水平无显著性差异。与CsA治疗组相比，联合治疗组 移植肠平均存活时间显著性缩短，余指标无显著性差异。移植肠病理分级与 IDO的表达水平及Th2细胞因子表达水平呈明显负相关(PO．01)，与Thl细胞 因子表达水平呈明显正相关(P0．01)。结论：青藤碱具有一定的抗排斥作用， 但作用强度不高。青藤碱具有协同IDO高表达DC抑制小鼠小肠移植排斥反 应的作用，该作用与诱导移植肠局部IDO表达及rnl细胞分化由Thl向Th2偏 移有关。 关键词：吲哚胺2，3双加氧酶，树突状细胞，T淋巴细胞增殖，色氨酸， ，j、肠移植，排斥反应，小鼠 3 墨堡垦型查兰堕兰三竺塞兰芏焦垒苎 墨堡垦型查