upf1在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究内科学消化系病专业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝’江盘堂或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：铂治翻f_ 签字目期：沙本厂月／日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝、江盘堂可以将 学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：斩够 导师签 签字日期：、徊胆白／日 签字目期：z夕／∥年厂角≯日 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 本论文能顺利完成，离不开许多老师、朋友的指导、帮助、关心和支持，在 此我谨怀诚挚的心情表示衷心感谢。 首先感谢导师虞朝辉主任，从课题设计，开题，实验过程及论文的写作等都 给予精心指导。他严谨的治学态度、精益求精的工作作风、扎实的理论基础、对 科研的热情和弃而不舍的执着钻研精神给我留下了深刻的印象，使我受益匪浅， 并将终身受益。在此谨向虞老师致以最诚挚的谢意和最崇高的敬意! 感谢厉有名教授等浙一医院消化科的诸位老师，对我的课题给予了一贯的支 持和帮助。 感谢万星勇、陆超等许多同学们在我实验摸索阶段给予指导和无私的帮助。 最后，我要感谢一直不断支持，鼓励我的家人、朋友、同事以及所有关心和 帮助我的人。 何海键 2016年3月 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 UPFl在非酒精性脂肪性肝病中的作用研究 浙江大学医学院 内科学(消化系病) 硕士研究生 何海键 导 师 虞朝辉 中文摘要 背景： 非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFI。D)患病率逐年增 高，已成为最常见的慢性肝病之一，NAFLD的发生发展机制目前尚未完全明确。 UPFI是无意义编码的mRNA降解(nonsense—mediated mRNA decay，NMD)中的 关键蛋白，已有研究表明UPFl在细胞DNA复制及修复中起重要作用，NMD及 DNA的损伤与肝内脂质代谢及肝细胞损伤相关，但UPFl在NAFLD发病机制中 起的作用尚不明确。 目的： 本研究通过对L02细胞及小鼠模型的实验，探讨UPFl在NAFLD发病机制中 起的作用。 方法： 1．通过给C57BL／6小鼠MCD饮食5周建立NAFLD模型小鼠。将肝脏L02 细胞置于软脂酸、油酸(两者1：2混合)的高脂环境中培养出NAFLD肝细胞。然 后用油红染色法观测细胞内脂滴，收集细胞冻液，测定其中TG含量，评估建模情 况。 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 2．从小鼠肝脏组织中及FFA诱导的L02细胞中提取RNA，进行逆转录，对 合成的UPFl引物进行实时荧光定量PCR，运用Western Blot方法检查UPFl蛋白 的变化，比较正常小鼠肝细胞和NAFLD小鼠、正常L02细胞和脂变的L02细胞 内UPFl及蛋白的变化。 3．运用siRNA干扰的方法抑制NAFLD细胞模型中UPFl的表达，检测其脂 肪变性程度，并进一步检测UPFl表达抑制后脂肪酸B氧化基因(PGCla，PPARa， CPTla)、ROS等指标的变化，探讨UPFl在非酒精性脂肪性肝病的发病中的作用。 结果： 1．FFA处理L02细胞后，UPFl mRNA及UPFl蛋白表达下降；MCD饮食处 理后模型小鼠UPFl mRNA及UPFl蛋白表达下降。 2．抑制L02细胞UPFl表达后，UPFl mRNA表达显著下降，细胞内甘油三 酯含量明显增加。 3．抑制L02细胞UPFl表达后，PGCla mRNA，PPARa mRNA，CPTla mRNA 表达均下降。 4．抑制L02细胞UPFl表达后，ROS升高。 结论： UPFl可能在NAFLD的发生、发展中发挥一定的抑制作用，UPFl被抑制可 能是NAFLD的发病机制之一。UPFl被抑制后可能通过引起PGCla，PPARa， CPTla的表达下降，及ROS生成增多来促进NAFLD的形成。 关键词：非酒精性脂肪性肝病；NAFLD；上游移码蛋白；UPFl；PGCla；PPARa； CPTla；活性氧簇；ROS III 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙