保健食品中大豆异黄酮的检验方法-北京质量技术监督局.DOCVIP

GB/T ××××—×××× PAGE II PAGE 1 国家质量监督检验检疫总局 发布××××-××-××实施××××-×× 国家质量监督检验检疫总局 发布 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 保健食品中大豆异黄酮的检验方法 高效液相色谱法 Method for Determination of Soybean Isoflavone in Health-care Food HPLC (征求意见稿) GB/T ××××—×××× 中华人民共和国国家标准 ICS GB/T ××××—×××× PAGE I 前 言 本标准由全国食品工业标准化委员会提出并归口。 本标准起草单位：北京市朝阳区产品质量监督检验所、红牛维他命饮料有限公司、中国食品发酵工业研究院。 本标准主要起草人： PAGE 4 保健食品中大豆异黄酮的检验方法 主题内容与适用范围 本方法规定了以大豆异黄酮为主要功能性成分的保健食品及其原料（大豆异黄酮粉末）中大豆异黄酮含量的测定方法。 本方法适用以大豆异黄酮为主要功能性成分的片剂、胶囊、口服液、保健饮料及大豆异黄酮粉末中的大豆异黄酮含量的测定。 本方法的检出限:进样量为10μL时，大豆苷(daidzin)、黄豆苷(glycitin) 和染料木苷(genistin)、大豆黄素(daidzein)、黄豆黄素(glycitein)和染料木素(genistein)的最低检出浓度均为：0.02μg/mL，最低检出量如下: 以大豆异黄酮为主要功能性成分的片剂、胶囊及大豆异黄酮粉末0.005mg/g, 口服液的最低检出量为:0.0002mg/mL，保健饮料最低检出量为:0.0002mg/mL。 规范性引用文件 GB16740-1997 保健（功能）食品通用标准 原理 样品制备、提取、过滤，经高效液相色谱仪分离，依据保留时间定性，外标法定量。 术语和定义 4.1 大豆异黄酮 soybean isoflavone 大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一类次生代谢物，属天然黄酮类物质，具有异黄酮类化合物的典型结构。 试剂 5.1 乙腈，色谱纯，经0.20μm滤膜过滤。 5.2 甲醇，优级纯。 5.3 80%甲醇，取甲醇80mL，水20mL，混匀。 5.4 磷酸，分析纯。 5.5 pH=3.0的水：超纯水用磷酸调节pH至3.0，经0.20μm滤膜过滤。 5.6 二甲基亚砜，色谱纯。 5.7 50%二甲基亚砜，取二甲基亚砜50mL，水50mL，混匀。 5.8 标准溶液：准确称取大豆苷(daidzin)、黄豆苷(glycitin) 和染料木苷(genistin)、大豆黄素(daidein)、黄豆黄素(glycitein)和 染料木素(genistein)各4mg(精确至0.00001g)，分别置于10mL容量瓶中，加入二甲基亚砜接近至刻度，超声处理30min，用二甲基亚砜定容。此溶液每毫升相当于0.40mg大豆苷(daidzin)、黄豆苷(glycitin) 和染料木苷(genistin)、大豆黄素(daidein)、黄豆黄素(glycitein)和 染料木素(genistein)。 5.9 大豆苷(daidzin)、染料木苷(genistin)和黄豆苷(glycitin)、大豆黄素(daidein)、黄豆黄素(glycitein) 、染料木素(genistein)标准使用液：吸取适量的标准溶液混合，加入等体积水，以50%二甲基亚砜稀释至实验所需浓度。 仪器 6.1高效液相色谱仪（带紫外检测器或二极管阵列检测器）。 6.2超声清洗器。 6.3酸度计。 分析步骤 7.1样品处理 取片剂20片粉碎混匀，过筛，备用；胶囊，取出20粒胶囊内容物，混匀，备用。 大豆异黄酮的提取：称取粉碎的片剂，混匀的胶囊0.01～0.1g(精确至0.0001g)于25ml容量瓶中,用80%甲醇溶液定容至25mL；吸取口服液0.1～1.0mL于10ml容量瓶中，用80%甲醇溶液定容至10mL；吸取饮料0.1～1.0mL于10ml容量瓶中，用80%甲醇溶液定容至10mL；超声处理20min，取出样品，摇匀，取1mL溶液于离心管中，以8000-10000rpm离心15min，上清液经滤膜（0.20μm）过滤。 7.2　高效液相色谱参考条件 7.2.1 色谱柱：Eclipse Plus C18 4.6mmｘ250mm，5μm,或相当。不锈钢柱。 7.2.2 流动相：乙腈：水（pH=3.0）。 7.2.3 梯度洗脱条件：12%～18%乙腈，0～10min；18%～24%乙腈，10～23min；24%～30%乙腈,23～30min；30%乙腈,30～50min，80%乙腈，50～55min。 7.2.4 进样量：10μ