杭白菊总黄酮的血管作用及其机制的研究-生理学专业论文.docxVIP

浙江火学硕士学位论文中文摘要 浙江火学硕士学位论文 中文摘要 杭白菊总黄酮的血管作用及其机制的研究 浙江大学医学院 生理学 硕士研究生 金红峰 导 师 夏强教授单绮娴博士 背景 高血压和冠状动脉粥样硬化性心脏病是现代人群的多发病，它们病因复杂，治疗周 期长。血管平滑肌细胞在高血压与冠状动脉粥样硬化性心脏病的病理变化中扮演着十分 重要的角色。血管平滑肌细胞的过度增殖是高血压和动脉粥样硬化的主要环节之一。也 是经皮冠状动脉腔内血管成形术后再狭窄发生的关键因素。另一方面，血管平滑肌的持 续收缩可能是高血压患者病程进展、继而发生并发症的重要影响因素。因此，如何利用 药物有效地控制血压、抑制血管平滑肌的增殖成为近年来心血管领域研究的热点。 杭白菊(Dendranthemamorifolium俾amaO TzveL)又称甘菊，是我国传统的栽培药 用植物和浙江省八大名药材“浙八味”之一。药物分析表明，杭白菊内含菊甙、嘌呤、 氨基酸、黄酮类及多种维生素和微量元素。经现代中医药理学证明，杭白菊有清热、平 肝、明目功能。根据报道，菊花对冠心病和高血压有治疗作用，对在体心脏有明显的扩 张冠脉、增加冠脉流量、提高心肌耗氧量的作用，并减慢心率，影响心肌收缩力。本实 浙{工大学硕士学位论文验室以前的研究表明，杭白菊提取物可以增加大鼠心脏的收缩力和冠脉流量，并且能对 浙{工大学硕士学位论文 验室以前的研究表明，杭白菊提取物可以增加大鼠心脏的收缩力和冠脉流量，并且能对 抗由缺血／复灌引起的心脏收缩力下降和冠脉流量的下降。近年来发现，黄酮类化合物对 心脑缺血损伤、肝损伤、心律失常等具有保护作用。我们推测，杭白菊中的黄酮类化合 物可能对血管平滑肌细胞也具有相似的保护作用。因此，本研究在浙江大学药学院采用 新工艺制备的基础上，在大鼠离体主动脉灌流模型上对杭白菊总黄酮[total flavones from dendranthema morifolium(Ramat．)Tzvel．cv Han∥u，FDM】的血管作用及其机制进 行了探讨，在体外培养血管平滑肌细胞模型上观察了FDM对血管平滑肌细胞增殖的影 响，以较全面的了解FDM的血管效应，为进一步研究以血管为靶点的中药成分(包括 杭白菊)作用机制以及可能的l临床应用打r基础。 目的 1 在大鼠离体主动脉灌流模型研究杭白菊总黄酮(FDM)对血管的舒张作用并探讨其 机制。 2 研究杭白菊总黄酮对血管平滑肌细胞增殖的作用，观察杭白菊总黄酮对胰岛素诱导 的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖的影响 方法 1 大鼠主动脉灌流实验 大鼠断头处死后，迅速取出胸主动脉，小心去除附在胸主动脉外的脂肪及结缔组织， 剪成约3mm长的血管环。在部分实验中，用小镊子轻轻摩擦血管内壁以破坏血管内皮。 将血管环悬挂在含有10ml的K-H液浴槽中，温度37。C，持续通入95％02+5％C02的 混合气体。记录血管环张力变化。 2 _}i『i江大学硕士学位论文2 _}i『i江大学硕士学位论文 2 平滑肌细胞原代和传代培养 11原代培养 大鼠颈椎脱臼致死，固定于鼠板(用大头针)，分离胸腹主动脉并放入盛有Hank’s 液的细胞培养皿中，转入无菌室；去除血凝块和血管外膜层，放入另一盛有Hank’s液 的细胞培养皿中，剪去血管外的小分支，放入含10％胎牛血清的DMEM中，以去除血 管内皮，入另一含10％胎牛血清的DMEM中，剪碎血管组织至1 x lmm，组织块转入 玻璃培养瓶中，均匀贴壁，6天左右换液。 2)传代培养 细胞长至融台后，加o．25％胰蛋白酶+o．02％EDTA消化液消化细胞，用吸管反复 抽吸打散细胞，离心：1500 x 5分钟，加D．Hank’s液洗一次，再加10ml DMEM培养液， 用吸管抽吸吹打分散细胞，分装于2个培养瓶。在倒置显微镜下可见圆形细胞。放入细 胞培养箱中培养。 3 噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖 取原代培养的5～6代的血管平滑肌细胞，接种于96孔培养板内，培养24小时， 改成无血清培养基培养24小时。测量前4小时每孔加入5 mg／ml的噻唑蓝 (3一(4，5一dimethylthiazol一2-y1)一2，5-diphenyltelrazolium bromide，MTT)15 pI，4小时后，吸 取培养液，每孔加入DMSOI州，摇匀10分钟。用酶标仪在波长570 rlrn的波长下， 测吸光度。 结果 I、FDM对PE预收缩的主动脉环张力的影响 浙江大学硕士学位论文当PE引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后，累积性增加FDM的浓度(5×10一～ 浙江大学硕士学位论文 当PE引起大鼠胸主动脉环的收缩达最大幅度后，累积性增加FDM的浓度(5×10一～ 5