番茄细菌性斑点病菌溃疡病菌青枯病菌和疮痂病菌的四重PCR检测.PDF

园艺学报，2018 ，45 (11) ：2254 –2264. Acta Horticulturae Sinica 2254 doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0153；http ：//www. ahs. ac. cn 番茄细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮 痂病菌的四重 PCR 检测方法 1,2 1,* 1 1 2 1,* 康华军 ，柴阿丽 ，石延霞 ，谢学文 ，袁军海 ，李宝聚 1 2 （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081 ； 河北北方学院，河北张家口 075061 ） 摘 要：针对引起番茄细菌性病害的细菌性斑点病菌（Pseudomonas syringae pv. tomato ，Pst ）、溃 疡病菌（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis ，Cmm）、青枯病菌（Ralstonia solanacearum ，Rs ） 以及疮痂病菌（Xanthomonas campestris pv. vesicatoria ，Xcv ），建立了四重PCR 检测技术，为病害的快 速、准确诊断提供技术支持。根据 gap1 基因设计 Pst 特异性引物 BW-F/BW-R ，经 PCR 条件优化，扩增 出了 375 bp 的特异性片段。将设计的引物与已报道的 3 种细菌特异性引物组合，通过设定不同的退火温 度、引物浓度、循环次数以及延伸时间，探索影响四重 PCR 扩增的因素，优化了其反应体系。四重 PCR 反应体系中的引物对 BW-F/BW-R 、Fan1/Fan2 、RS-1-F/RS-3-R 和 XCVF/XCVR 可分别扩增出细菌性斑点 病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮痂病菌长度为 375、146、716 和 517 bp 的特异性目的片段，反应体系退 火温度为 57.1 ℃，4 对引物的终浓度分别为 0.24、0.16、0.16 和 0.08 μmol · L-1 ，延伸时间 45 s ，35 个循 环。该四重 PCR 反应体系可快速检测田间番茄发病植株中的细菌性斑点病菌、溃疡病菌、青枯病菌和疮 -1 -1 痂病菌，灵敏度达到 10 ng · μL 。 关键词：番茄；细菌性斑点病菌；溃疡病菌；青枯病菌；疮痂病菌；四重 PCR 中图分类号：S 641.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2018 ）11-2254-11 Quadruple PCR Detection of Pseudomonas syringae pv. tomato ，Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis，Ralstonia solanacearum and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria in Infected Tomato Tissues 1,2 1,* 1 1 2 1,* KANG Huajun ，CHAI Ali ，SHI Yanxia ，XIE Xuewen ，YUAN Junhai ，and LI Baoju 1