甘蓝型油菜DH植株创建及其倍性的流式鉴定-中国油料作物学报.PDF

２０１０年９月 中国油料作物学报 ２０１０，３２（３）：３４９－３５３ Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｒｎａｌｏｆｏｉｌｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅｓ 甘蓝型油菜 ＤＨ植株创建及其倍性的流式鉴定 １，２§ １§ １ １ ２ １ 介智靖 ，闫晓红 ，方小平 ，杨　洁 ，黄进勇 ，魏文辉 （１．中国农业科学院油料作物研究所基因组学与分子生物学研究室，农业部油料作物生物学 重点开放实验室，湖北 武汉４３００６２；２．郑州大学生物工程系，河南 郑州４５０００１） 　　摘要：以甘蓝型油菜大粒品系和小粒品系的小孢子为试验材料，研究取样时期、花蕾大小、培养基类型及添加 成分对小孢子产胚率的影响，利用流式细胞仪对小孢子再生植株及加倍植株进行了准确、快速的倍性分析。结果 表明，始花期为最佳取蕾时期，花蕾大小在２．５～３．５ｍｍ为宜，培养基以液体培养基最好。培养基中加入０．１ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ可以促进小孢子胚的发生，而活性炭对小孢子培养没有明显的促进作用。流式细胞仪倍性检测显示小孢子 再生植株加倍后的双单倍体（ｄｏｕｂｌｅｄｈａｐｌｏｉｄ，ＤＨ）占４９％，还存在少量的三倍体（１１．３％）、四倍体（１．１％）及嵌合 体（２７．３％）植株。本研究为油菜材料的快速纯合及其ＤＨ系群体的构建等提供了新的经验。 关键词：甘蓝型油菜；小孢子；单倍体；双单倍体；倍性鉴定 中图分类号：Ｓ５６５．４０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１０）０３－０３４９－０５ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｄｏｕｂｌｅｄｈａｐｌｏｉｄｐｌａｎｔｓａｎｄｆｌｏｗｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｐｌｏｉｄｉｅｓｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ １，２§ １§ １ １ ２ １ ＪＩＥＺｈｉ－ｊｉｎｇ ，ＹＡＮＸｉａｏ－ｈｏｎｇ ，ＦＡＮＧＸｉａｏ－ｐｉｎｇ，ＹＡＮＧＪｉｅ，ＨＵＡＮＧＪｉｎ－ｙｏｎｇ，ＷＥＩＷｅｎ－ｈｕｉ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｏｍｉｃｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＯｉｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙ ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯｉｌＣｒｏｐＢｉｏｌｏｇｙｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ ４３００６２，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＬａｒｇｅａｎｄｓｍａｌｌｓｅｅｄｌｉｎｅｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓＬ．ｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｍｉｃｒｏｓｐｏｒｅｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｈａｐｌｏｉｄｉｄｅｎｔｉ ｆｉｃａｔｉｏｎｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｅｆｆｅｃｔｅｄｅｍｂｒｙｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｉｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔ ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｂｕｄｍａｔｅｒｉａｌｏｆ２．５ｔｏ３．５ｍｍｇｒｅｗａｔｐｒｉｍａｒｙｆｌｏｗｅｒｉｎｇｐｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅｌｉｑｕｉｄｍｅｄｉｕｍａｄｄｅｄｗｉｔｈ ０．１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡｗａｓａｂｌｅｔｏａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｃｔｉｖａｔｅｄｃａｒｂｏｎｈａｓｎｏｏｂｖｉｏｕｓｐｒｏｍｏｔｉｏｎｔｏｔｈｅｏｃ ｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｅｍｂｒｙｏ．Ｔｈｅｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅｑｕｉｃｋａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｏｎｐｌｏｉｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔａｆｔｅｒｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅｄｏｕｂｌｉｎｇ，ｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆｄｏｕｂｌｅｄｈａｐｌｏｉｄ（ＤＨ）ｐｌａｎｔｓｗｅｒｅ４９％．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅａｌｓｏａｆｅｗｏｆ ｔｒｉｐｌｏｉｄ（１１．３％），ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ（１．１％），ａｎｄｃｈｉｍｅｒａｐｌａｎｔｓ（２７．３％）．Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔ