使用液质联用系统分析未衍生化氨基酸的方法-Agilent.PDFVIP

应用简报 食品检测、代谢组学 使用液质联用系统分析未衍生化 氨基酸的方法 用于食品、生命科学和代谢组学应用 作者 摘要 Andrew Kennedy 和 本应用简报介绍了一种针对未衍生化氨基酸分析优化的方法。 Adam Bivens 氨基酸的极性使其难以进行反相液相色谱分析。然而，亲水相互作用色谱 (HILIC) 能保留并分离复杂的氨基酸混合物，同时还具有与传统反相色谱类似的工作流程。 HILIC 与质谱的组合提供了一种简单而功能强大的氨基酸分析解决方案。 前言 • Eppendorf 移液器和连续分液器 样品前处理 • 涡旋器和多管涡旋器 (VWR, Radnor, 将氨基酸标准品与水混合至表 1 所列出 事实证明，在低 pH 与正离子模式 LC/MS PA, USA) 的浓度，无需进一步样品前处理即可直接 检测条件下，采用亲水相互作用色谱 分析。 (HILIC) 分离未衍生化氨基酸，能够获得最 • HDPE 溶剂瓶 (VWR, Radnor, PA, USA) 佳的整体灵敏度和色谱分离性能。Agilent 流动相前处理 仪器 InfinityLab Poroshell 120 2.7 µm HILIC-Z 和 用水配制 200 mM 甲酸铵储备液，并用 • Agilent 1290 Infinity II 二元泵 (G7120A) HILIC-OH5 化学键合相为氨基酸的 LC/MS 甲酸将 pH 调节至 3 。将水与储备液按 分析提供了两个理想选择。二者均可对较 • Agilent 1290 Infinity II 样品瓶进样器 9:1 稀释制得流动相 A。将乙腈与储备液 难分离的亮氨酸/异亮氨酸同质异位素以 (G7129B) 按 9:1 稀释制得流动相 B。两种流动相的 及多种氨基酸实现完全分离。 • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱 甲酸铵最终浓度均为 20 mM。 (G7116B) 流动相与玻璃器皿过度接触会引入离子物 实验部分 • Agilent 1290 Infinity 液相色谱系列超 质，干扰并抑制质谱检测。储存在玻璃瓶 低扩散工具包 (5067-5189) 中的流动相应定期更换，或将玻璃瓶换成 试剂与化学品 所有试剂均为 HPLC 级或更高等级。超 • Agilent MassHunter 工作站软件 HDPE 瓶。 LC/MS 级乙腈购自 J.T. Baker (Center • Agil