荧光显微镜照片.PPT

坎坎坷坷 实验一 细胞形态、细胞器的显微结构的观察 一、实验目的 1.了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方法。 2.熟悉光学显微镜下细胞的基本形态与结构。 二、实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。 经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。 显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。 厚标本和薄标本 数码互动显微镜 2.体视显微镜 可直接进行解剖及观察并具有正像立体感 荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别： 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上。 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。 9. 倒置显微镜（组织培养中长工作距离的） 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上（右图），用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。 四、实验用品 各种组织切片  二、观察操作 放上切片，将光源调到自己习惯的亮度。 视度补偿：调节目镜双筒找到自己的瞳距，此时两眼镜下的图象重合在一起，横拉板上的数字（例如：64）就是自己的瞳距，然后将两只目镜外侧的刻度线调到瞳距的数字的位置。 调焦：将绿色光标移至视野中央，开始观察，如需提问，按呼叫按钮。 瞳 距 调 节 屈 光 度 调 节 粗 调 松 紧 调 节 旋 钮 聚 光 镜 中 心 调 节 孔径光栏调节 孔径光栏开度与图象 N.A聚=(0.6-0.8)N.A物 * * 细胞生物学实验 生命科学学院 二OO八年九月 显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离， 分辨距离越大，则分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距离来表示的。 其计算公式为: D=0.61λ/N·A N·A·=n·sina/2 式中D为分辨率，A为光波波长， n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角）， N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小于180?，所以sina/2的最大值必然小于1。 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2 焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 4 - 5 um 2um 基础知识 基础知识 三、显微镜概述 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。 1.光学显微镜 普通生物显微镜由3部分构成： ①照明系统：包括光源和聚光器。 ②光学放大系统：由物镜和目镜组成， 是显微镜的主体。 ③机械装置：用于固定材料和观察方便， 包括镜台(载物台) 、调节器和、 物镜转换器(旋转器)等。 尼康E-600显微镜 3.荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色） 4. 激光共聚焦扫描显微镜（具有高分辨率可进行显微断层扫描） LCSM照片 蓝色为细胞核，绿色为微管 （能观察活细胞） 5.暗视野显