坚强芽孢杆菌PC465在凡纳滨对虾养殖中的应用技术及效果评价-临床兽医学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 5 real-time PCR 的测定。结果表明，在 35d 的实验期间内，饲料中坚强芽孢杆 菌 PC465 添加量为 106、108 和 1010CFU/g 均能显著提高凡纳滨对虾的生长率 (P0.05)，1010CFU/g 的添加量组的对虾在整个试验期的促生长效果和 STAT 基因表达量略高于 106 和 108CFU/g 添加量组；但综合评估生长促进效果和芽 孢杆菌添加量，则 106CFU/g 添加量的比增效率达 5.19×10-7CFU，远远高于 其他组；在饲料中用 107CFU/g 的坚强芽孢杆菌 PC465 添加量，在 35d 的实 验期间内，采取间隔“1+1”、间隔“4+3”和连续不断的方式投喂凡纳滨对虾， 均能显著提高对虾的生长率和对虾淋巴器官中 STAT 基因的表达水平 (P0.05)，且以连续投喂组的效果最好。 第三部分：坚强芽孢杆菌 PC465 在凡纳滨对虾工厂化养殖中的应用及效 果评价。将第一部分得到的含有一定添加浓度的 PC465 的饲料应用到 30m3 养殖水体（30m2×1m）的凡纳滨对虾工厂化养殖生产中，期间定期采样分析 凡纳滨对虾生长率，存活率，肠道消化酶活性，肠道内表面结构，用于评价 PC465 的作用效果。结果显示：在 30d 的实验期间内，饲料中坚强芽孢杆菌 PC465 添加量为 107 和 109CFU/g 均能显著提高凡纳滨对虾的生长率和 SGR 以及存活率 (P0.05) ，添加饲料中坚强芽孢杆菌 PC465 添加量为 107 和 109CFU/g 均能显著提高凡纳滨对虾能够显著提高对虾肠道的淀粉酶和蛋白 酶活性(P0.05)；并且在连续投喂第 15 天能够显著促进对虾肠道脂肪酶的活 性(P0.05)；添加添加饲料中坚强芽孢杆菌 PC465 添加量为 107 和 109CFU/g 能够显著改变对虾肠道内表面的结构，并且 109CFU/g 的投喂浓度显著地改 变期内表面结构。 第四部分：坚强芽孢杆菌 PC465 添加到饲料中对凡纳滨对虾血淋巴免疫 相关因子表达水平的影响。将 PC465 添加到饲料中投喂对虾，在实验开始后 的 0h，6h，18h，48h 和 168h 取样，抽取血淋巴注入 RNAlater 中 4℃过夜后 置于-80℃保存。提取血淋的 Total RNA 后进行反转录和 real-time PCR 分析 proPO，SP，Crustin，Penaeidin，lysozyme 和 Dicer-1 的免疫相关基因的表达 水平。结果显示了饲料中添加 PC465 浓度为 107 和 109CFU/g 能够有效地提 高凡纳滨对虾血淋巴中溶菌酶，crustin，Pen-3a 和 lvDcr-1 相关免疫基因的表 达（P0.05），并且 107 浓度能够显著提高 SP 的表达水平（P0.05），证明 PC465 能够显著的促进凡纳滨对虾免疫力。 关键词：坚强芽孢杆菌 PC465，凡纳滨对虾，免疫饲料，生长，免疫功 能，防病效果 Application of Bacillus firmus PC465 in shrimp aquaculture and the evalution of effects on growth, disease resistance of L.vannamei ABSTRACT The research aimed to the extensive implication of a commensal bacteria in the intestine of shrimps in the shrimp aquaculture and the evaluation of the effects on L.vannamei. The research can be divided into four sections: Firstly, we researched the optimal culturing parameters for Bacillus firmus PC465 to culture this probiotic in large scale, in order to implicate the probiotic for better practice of shrimp aquaculture. We got the growth curve via the measurement of the absorbance for bacterial suspension at 600nm at certain times in turns; we also got t