健脾祛痰化瘀方药对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮、平滑肌细胞信号转导的影响-中西医结合基础专业论文.docxVIP

生里!堕婴壅堕!!!!堑互塞生笙壅—主苎塑墨中文摘要 生里!堕婴壅堕!!!!堑互塞生笙壅—主苎塑墨 中文摘要 【研究背景反目的】 动脉粥样硬化是心血管系统中常见的病理现象和过程，也是危害人类健 康的许多心、脑血管疾病的重要病理基础，其发病机制尚未完全清楚。文献 研究表明，动脉粥样硬化是一组以动脉退行性和增生性为特征的血管病变， 中医认为其基本病机属本虚标实，本虚为气血阴阳亏虚，标实为痰凝、血 瘀。其病理变化可概括为“因虚致实”、 “因实致虚”的恶性循环而终致 “本虚标实”的特征，病理关键为痰凝血瘀，并认为As是痰瘀同病之症， 以痰瘀互阻证为多， “脾为生痰之源”、 “膏粱厚味易酿痰生湿”，痰水和 瘀血成为一种病理产物和致病因子，是阴津为病的两个不同方面的表现形 式，阳气失调则阴津为病，气滞则血瘀，气结则痰生，痰瘀有其同源性。中 医理论有“痰瘀同源”、 “痰瘀相关”之说，因而治疗上近年也更多注重 “从痰论治”、 “痰瘀同治”，辅以补肾、健脾益气、疏肝理气等综合治 法。 导师宋剑南曾认为LPo是中医冠心病血瘀和痰浊两证的中心环节及 “痰瘀相关”的生化物质基础，内皮细胞的损伤是由痰致瘀的主要病理特 征，而脂质代谢紊乱及引起脂质代谢紊乱的内外因素是其病因所在。痰瘀两 者既为同源异物，又有相互消长、相互依存的关系。 沥水调脂胶囊是根据健脾祛痰化瘀治法组方开发而成，由半夏、陈皮， 茯苓、甘草、水蛭、川芎、竹沥七味中药组成。在以往的研究中已发现，该 药可降低高脂血症动物血清Tc、TG、LDL水平，显著降低内皮细胞通透性 及血浆、红细胞膜中MDA含量，明显升高动脉血管壁一氧化氮合酶活性及 其mRNA的表达，降低内皮素mRNA的表达，下调原癌基因c—sis’c．讯vc mRNA的表达，上调抑癌基因p53 mRNA的表达，起到抗氧化、保护血管 第4页 生里生量婴窒堕!!!!丝堑茎竺堡墨 生里生量婴窒堕!!!!丝堑茎竺堡墨 !茎塑兰 细胞，对抗As的作用。对活血化瘀、健脾化痰、痰瘀同治三种治法进行比 较，发现在降脂、抗脂质过氧化方面及主动脉内膜脂斑形成、改善细胞膜结 构和膜流动性方面以痰瘀同治的综合结果最佳，因此认为，动脉粥样硬化和 高脂血症的中医治疗应痰瘀同治。 针对致As的强危险因素ox．LDL对血管内皮细胞、平滑肌细胞的影 响，我们设计了本次实验，采用血清药的方法，观察沥水调脂胶囊在信号转 导方面的影响，探讨健脾祛痰化瘀法在As中对血管细胞的作用。 【材料和方法】 1．细胞培养：人脐静脉内皮细胞、人脐动脉平滑肌细胞。 2．血清药的制备：以健脾祛痰化瘀方药一沥水调脂胶囊按成人临床日用 量等效剂量的8倍(按体表面积计算)给大鼠灌胃，正常组以水代替，制备含 药及正常血清，以相应培养液制成含5％、lO％、20％浓度含药血清的培养 液，并以正常鼠血清将各组培养液血清浓度均调至20％，将实验分为正常 组、n—LDL组、ox—LDL组、不同浓度含药血清+ox—LDL组及维生素E对照 组，其中VitE使用终浓度为loo恤gfml。 3．氧化型低密度脂蛋白的制备：将天然低密度脂蛋白置于含终浓度为 10¨M cus04的PBs中，4℃反应24h，以硫代巴比妥酸反应物的值来表示 氧化程度，结果ox-LDL的TBARs值较n—LDL高出lo余倍，琼脂糖凝胶电 泳显示oX—LDL电泳迁移率较n—LDL快，证明LDL已被氧化。实验中oX． LDL使用终浓度为50“咖lo 4．胞内ca2T的测定，以荧光探针Fluo．3／AM，采用流式细胞仪，分别对 huVEc和VsMc内游离钙离子进行检测。 5．使用放射性同位素标记法，对平滑肌细胞膜PKc活性进行检测。 第5页 中国中医研究院2000级研究生论文 中国中医研究院2000级研究生论文 中文摘要 【结果与讨论】 1．结果显示，n．LDL作用于内皮细胞，细胞内ca2+相对于空白组无明显 增加，ox—LDL作用后ca2+浓度显著增加，与空白组比较Po．oI。5％、10％ 含药血清组、vitE组ca2+浓度相对于Dx．LDL组减弱(PO．05)，20％含药血 清组荧光强度相对于ox—LDL组显著减弱(Po．01)。说明沥水调脂胶囊可抑 制ox．LDL诱导的内皮细胞胞浆游离ca2+浓度的升高，含药血清各浓度之间 未发现呈线性关系，从趋势上看以20％浓度组作用最强。 2-n—LDL作用于平滑肌细胞，细胞内ca2+浓度相对于空白组无明显增 加，ox—LDL刺激后ca2+浓度显著增加(PO．01)，而沥水调脂胶囊对ox—LDL 诱导的ca”浓度增加具有明显的抑制作用，5％、10％含药血清组与ox．LDL 组比较Po．05，20％合药血清组作用最强，与ox．LDL组比较有显著性差异 (Po．01)。ox—u)L可使VsMc胞膜PK