刘贤勇中国农业大学动物医学院.DOCVIP

PAGE PAGE 2 中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 鸡肠上皮细胞体外培养及其应用 申 请 人 刘贤勇 工作单位 动物医学院 联系电话 电子信箱 liuxianyong@cau.edu.cn 填表日期 2017.3.23 中国农业大学教务处制 项目名称 鸡肠上皮细胞体外培养及其应用 项目起止时间 2017.3-2018.3 项目申请人情况 姓名 刘贤勇 性别 男 出生日期 1981.7.12 最后学历与学位 博研/博士 专业技术职务 副教授 从事专业 兽医寄生虫学 1项目概况 肠道系统疾病由于其严重危害养鸡业、造成巨大经济损失而备受人们关注。而作为肠道最重要的组成部分——肠上皮细胞是大量病原、如艾美耳球虫的宿主细胞或是其生境（niche）的主要组成部分。当前，鸡肠上皮细胞只能通过组织分离和原代培养而获得。因此，通过体外转化策略培育出一株鸡肠上皮来源的细胞系对病原与宿主相互关系的研究将十分重要。 目前常用慢病毒或直接转染的方式对原代细胞进行转化而试图获得永生化的细胞系。原代细胞永生化的基因包括端粒酶基因，SV40病毒大抗T抗原基因。将上述基因重组构建的质粒通过转染，或者化学转化实现对原代细胞的转化，再通过连续传代的筛选最终获得具有永生化特征的细胞。 申请人通过北京市自然基金的支持，在前期已经进行了鸡肠上皮原代细胞的分离及永生化的探索。目前已经初步实现了肠道上皮细胞的原代培养和传代，并已构建用于永生化转染的慢病毒包装载体和直接用于转染的真核表达载体。这些基础工作将对于本项目提供了技术支持。 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 首先，对参与该项目的学生进行理论和实验技能培训。理论上，指导学生阅读 《动物细胞培养》第六版（Freshney主编）等书籍。并指导学生完成细胞培养无菌操作、细胞分离、细胞传代等基本的细胞培养技术。 指导学生阅读文章，设计鉴别分离的原代细胞的技术，利用GenBank等网站查找肠细胞标志性蛋白序列，自行设计基因引物，并且鉴定培养细胞的cDNA。指导学生使用单克隆抗体检测目的蛋白的分泌。指导学生对所获得的实验数据进行分析，使其基本掌握利用统计分析软件和图像制作软件。 培养学生写作科技论文的能力。根据学术论文的特点，使学生了解摘要，引言，材料方法等各个部分正确的写作方法。结合本研究的成果，指导学生完成学术论文初稿的写作。 本项目将针对实验的各个环节对学生掌握的理论知识和实验技能进行考核。考核内容包括：完成3-5篇论文的阅读，掌握实验室规范操作技术和安全操作知识；掌握细胞分离和培养技术；并独立或者成小组方式完成1篇学术论文初稿。 三、项目实施的基础和条件 本课题组所在的国家动物寄生原虫实验室具备完善的实验室设备，如细胞培养室、高压液相色谱、分光光度计等。同时本课题组也有进行动物实验的动物房及相关设备，为本项目实施提供了实验室技能培训、实验动物饲养及相关检测指标测定的必要设施。因此在本申请人的悉心指导下，参加本项目的学生能够完成项目预期计划。 四、学生提交的成果 （1）在本申请人指导下完成在永生化基因在鸡来源肠上皮细胞的转染，并且对细胞进行鉴定。 （2）在完成项目后，在本申请人指导下完成研究论文1篇并投稿。 五、经费预算 预算经费为2.00万元。主要用于购买实验动物、细胞培养液，质粒转染试剂盒等。 六、学院URP领导小组意见 签字 （盖章） 年 月 日