靛酚蓝-分光光度法测定发酵液中氨态氮含量研究.pdfVIP

靛酚蓝．分光光度法测定发酵液中氨态氮含量研究 梁剑光1 朱 玲2徐正军3 1(常熟理工学院生物与食品工程系，常熟，215500)2(南京工业大学制药与生命科学学院，南京，210009) 3(山东鲁南制药股份有限公司，临沂，276000) 摘要靛酚蓝一分光光度法是一种灵敏度高，对设备要求简单，线性相关性好，重现性高的氨态氮检测方法。 文中对该方法的检测波长、反应温度、时间以及催化剂浓度等条件进行了优化，确定了检测波长为637m，反应 条件为37℃、25mg屯的催化剂和20r11in的反应时间，并由此得到一条线性相关系数为0．9996的氨态氮标准 益线。同时，对靛酚蓝法用于普通发酵体系测定氨态氮进行了探讨。对常用发酵基质如碳源、氮源、金属离子以 及消泡剂等进行了考察，结果发现这些常用基质基本不影响本法的测定结果。最后，将该法用于泰乐菌素和阿 维菌素的发酵液测定并与离子选择电极法进行了比较，两种方法的测定结果无显著性差异，由此证明该方法是 一种准确可靠，切实可行的检测发酵液中氨态氮的方法。 关键词靛酚蓝，分光光度法，氨态氮，发酵 在微生物的发酵过程中，无机氨态氮是一种重要 本文是在进一步优化完善靛酚蓝方法的同时，对 的氮源物质，其浓度可影响发酵过程中菌体的生长和 于该方法用于生物发酵领域中的氨氮检测进行了深 产物的合成。有报道，高浓度的NH才会阻遏力复霉 入探讨，对于在发酵过程中可能影响靛酚蓝显色的一 素、氯霉素、放线菌素和白霉素的生物合成HJ。在头 些因素进行了研究，并由此确定了该方法的适应性， 孢菌素的发酵中，NH乒的积累超过40mmol几就会为发酵工业的氨态氮监测寻找了一种较为简便、切实 阻遏其的合成旧J。为此，在发酵过程中，对于氨态氮 可行的方法。 的监测非常重要，如通过控制氨态氮的水平来增加泰 1 材料与方法 乐菌素和柱晶白霉素的生产。 目前，用于氨态氮检测的手段主要有滴定法(甲 1．1仪器与试剂 醛滴定、蒸馏法)引、电位滴定法、氨选择性电极法[4] 1．1．1仪器 和分光光度法(靛酚蓝法【5j和纳氏试剂法[6]等)。滴 定法操作较为繁琐；氨选择性电极法则相对较为方 学仪器有限公司；删一2型电热恒温水浴锅，江苏金 便，但是在含有表面活性剂悬浮颗粒以及其它的一些 坛国华仪器有限公司；30L发酵系统，江苏镇江东方 复杂体系中则难以应用一1；分光光度法则是一种操 生物工程设备有限公司。 作方便、重现性和准确度都比较高的分析方法，在氨 1．1．2试剂 态氮的分析中用途广泛；纳氏试剂法是测定水中氨的 一种常用方法，但是该方法干扰因素多，灵敏度低；靛 析纯，国药集团化学试剂有限公司；亚硝基铁氰化钠， 酚蓝法则是一种非常适合的氨态氮分析方法。该方 分析纯，上海青析化工科技有限公司；NaClO，分析 法是利用氨在高pH条件下和酚以及次氯酸盐发生 纯，含有效氯5％，天津方正试剂厂。所有稀释、检测 反应而产生出一种靛酚蓝的蓝色化合物，颜色的深浅 用水均为重蒸水。 与N瞰的浓度具有很好的相关性，为此可以利用分 1．2方法 光光度法来检测氨氮的含量。这个反应最早是由 1．2．1氨态氮标准溶液 Berthelot于1895年发现的，而后则通过逐步改进而 8 原液：精确称取0．235 用于氨态氮的测定。通常该方法是用于相对简单体 稀释至100 mL，其含氨态氮量为500弘g／mL。 系中氨的浓度检测，如水中氨态氮的检测[3J，而对于