小量血液基因组DNA直接提取试剂盒离心柱型GK4005050.DOC

PAGE PAGE 1 小量血液基因组DNA直接提取试剂盒（离心柱型） GK4001-50 50 Preps GK4001-100 100 Preps GK4001-200 200 Preps 试剂盒组成 Components GK4001-50 50 Preps GK104001-100100 Preps GK4001-200 200 Preps GenClean Column 2.0-ml Collection Tube Proteinase K(a) Boiled RNase A Lysis Solution AW1 Solution(b) AW2 Solution(c) AE Buffer(d) TE-50(f) Protocol 50 50 1.2 ml 250 μl 15 ml 15.5ml 12ml 10 ml 15ml 1 100 100 2X1.2 ml 500 μl 30ml 31 ml 12ml 20 ml 15ml 1 200 200 4X1.2ml 2X500μl 60ml 62 ml 24ml 40 ml 25m 1 Proteinase K使用前，每管加入1 ml 无菌水溶解，混匀，分装后-20℃保存。 首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。 (c) 首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。 (d) AE Buffer为10 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA pH 8.5。TE(pH 8.0)或者水（pH7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。 (f) 本试剂盒中的TE-50是10 mM Tris-HCl， 50 mM EDTA pH 8.0。 基本原理: 临床常常需要从血液中抽提基因组DNA，用于病症的辅助性分析和诊断等。本试剂盒的设计是直接从全血中提取血液的DNA, 血液用裂解液处理后。GenClean柱膜能选择性吸附样品中基因组DNA，而不吸附蛋白质和其它非核酸类物质。经简单的洗涤步骤，即可得到样品基因组DNA。 主要用途: 本试剂盒主要用于从人或哺乳动物血液中提取基因组DNA，抽提出的DNA直接可用于PCR、Southern blot等分子生物学相关实验。本试剂盒是针对200μl或以下体积的样品可以直接提取，大于200μl的样品可以分管提取。或如裂解液不够，可单独购买本试剂盒中的裂解液，每个离心柱最多可用于提取1ml血液基因组的DNA,分管裂解后，在一个离心柱上，分多次离心实现全部基因组DNA的吸附。保存于4℃的血液，3天后核内DNA开始降解，如不能及时提取，请于-80℃保存。如果想一次处理更多血液样品，请选用本公司的其它血液提取试剂盒。本试剂盒也可用于细胞和革兰氏阴性菌基因组DNA的提取，提取革兰氏阳性菌基因组DNA需要自备溶菌酶。 主要特点： 1. 本试剂盒针对性强，操作快速简单。 2. GenClean柱回收血液基因组DNA效率高、纯度高。 血样的收集： 血液用ACD(0.48% Citric Acid，1.32% Sodium Citrate，1.47% Glucose)或0.5 M EDTA（pH8.0）抗凝。每6ml血液加1ml抗凝剂。建议最好不要采用肝素作抗凝剂，因为肝素是一些酶的活性抑制剂，因此在使用经肝素处理的血样直接进行PCR扩增时，PCR反应无法进行。而肝素酶I具有降解肝素的作用，如果在PCR反应体系中加入肝素酶I，或许可以促进PCR反应的顺利进行。一般肝素酶的用量为在50μl的PCR的反应体系中加1μl(0.5U/μl)的肝素酶。 提取基因组DNA操作步骤: 取样品 1a, 新鲜血液，4℃保存血液，或冷冻血液200 μl（4℃保存和冷冻血液需要先平衡到室温），直接进入下一步。 1b, 少于200μl血液，加入TE-50调节到200 μl, 进入下一步。 1c, 对于细胞（1×106～5×107）和革兰氏阴性细菌（最多可达5×108细菌，约0.5 ml过夜培养菌液）的基因组DNA 提取，离心收集细胞和菌体，吸净液体，悬浮于200μl TE-50。如冻存样品，余有液体，加入TE-50, 控制总体积在200μl，进入下一步。 1d, 对于禽类血液基因组DNA的提取，因红细胞有核，数量是白细胞1000倍，取1微升样品即可，加入TE-50 到200 μl,进入下一步。