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等离子体诱变微生物育种 摘要：介绍了一种新型诱变育种技术――等离子体诱变育种。首先对等离子体诱变的机理作了详细地阐述；其次分析了气体组分、气压、功率、气流速率和诱变时间五个影响等离子体诱变的主要外界因素；最后简单论述了在生物学领域中，等离子体诱变取得的成果，并展望其应用前景。 关键词：诱变；等离子体；活性氧自由基；微生物育 中图分类号：TB文献标识码：：/5.093 等离子体是除固态、液态和气态之外的第四种物质状态，由大量的离子、电子以及中性粒子组成。等离子体是由于物质分子热运动相互碰撞使气体分子电离出自由电子，电子在电场或磁场中加速形成高能电子，进而碰撞气体分子使其电离，往复循环，最终形成大量中性粒子、离子和电子的混合物质。由于电离过程中正离子带的电荷和电子总是对应出现，所以等离子体中正离子带的电荷数和电子的总数大致相等，总体来看为电中性。反过来，可以把等离子体定义为：正离子和电子的电荷密度大致相等的电离气体。 等离子体根据其粒子的温度不同可分为高温等离子体和低温等离子体，高温等离子体中所有粒子温度都处于较高的温度，而低温等离子体中只有电子处于较高温度，有较高的能量，其他粒子则处于常温。根据其产生方式不同，等离子体可分为微波等离子体、射频等离子体、介质阻挡放电等离子体、电晕等离子体、电弧等离子体等。 等离子体诱变是在其灭菌原理基础上，近几年才起步发展的一种诱变方法。在诱变育种的应用中，由于生物的热敏性只能采用冷等离子体诱变，该方法既弥补了化学方法的高污染性和变异单一性，解决了传统物理诱变法的遗传不稳定、变异率低等缺点。与近些年兴起的离子注入诱变法相比，等离子体诱变技术对真空的要求不高，不会因真空产生的低温或由离子束产生的高温而使细胞失活，该诱变技术可以较大程度的提高细胞存活率，提高诱变效率，是一种适合于微生物诱变育种的技术。 1等离子体诱变原理 微生物的变异是指外界因素使细胞内的DNA分子被破坏，使其大量的碱基配对错误，从而导致在DNA复制时产生基因突变，子代出现不同的基因型和表现型。冷等离子体中富含各种射线和粒子，等离子体诱变技术是通过对细胞有影响的光、荷电粒子和中性粒子等离子体对生物表层及遗传物质造成损伤、引发细胞修复，从而导致生物体表型和基因的改变。 在等离子体诱变中，射线和粒子对细胞表层造成的直接刻蚀作用。电子、自由基等对细胞壁造成直接损伤，改变细胞膜的通透性，从而使各种诱变因子易于进入细胞而与DNA发生作用。电子具有较高的能量，但其能量碰到分子易损失，只能作用于细胞表层与细胞壁上的大分子，使其在一定程度上受损。各种活性氧自由基与细胞壁的大分子产生复杂的化学效应和生物效应，也会对细胞壁和细胞膜的结构造成损伤。研究人员发现等离子体处理过的微生物胞内蛋白和核酸浓度减少，而胞外溶液中蛋白和核酸浓度增加，这表明等离子体可以破坏细胞壁和细胞膜结构，对细胞表层造成直接刻蚀，这样紫外线及各种粒子可以很容易地进入细胞与胞内物质反应。 当细胞的表层遭到破坏以后，进入细胞的各种诱变因子与细胞中的DNA产生作用。冷等离子体对微生物DNA产生伤害及诱变效应的可能原因有三种：（1）是紫外线直接照射DNA引起基因突变。对DNA有明显伤害作用的紫外?波段是200-280nm，而等离子体中此波段的紫外线剂量不足，难以对DNA造成较大的伤害。（2）是原子通过紫外线照射与微生物DNA分子结合形成不稳定化合物，造成微生物变异。在充入惰性气体的等离子体中，原子在紫外照射下也难以与其他物质反应，也不会对DNA造成损伤，但会产生自由基，通过自由基对DNA分子造成损伤。（3）是活性氧自由基与微生物DNA分子产生氧化反应，造成微生物变异。MathieuLeduc等将裸露的DNA分别由充氦气的介质阻挡放电等离子体和大气压辉光等离子体炬处理后均会得到断裂的DNA片段，并证实了活性氧自由基是造成DNA断裂的主要因素。因此活性氧自由基是等离子体诱变的主导因素。 诱变过程中，活性氧自由基进入细胞后，首先与DNA分子中的碱基或脱氧核糖发生反应生成其它自由基，如胸腺嘧啶经过氧化，生成胸腺嘧啶二羟基醇，鸟嘌呤被氧化后生成8-氧桥鸟嘌呤；导致DNA碱基被破坏，当细胞中DNA分子中高密度长片段发生损伤，会导致DNA复制过程受到抑制，激发细胞的修复机制，即SOS修复，在DNA分子的复制受到抑制时，会产生一种具有较低特异性的聚合酶、重组酶等。这些酶可催化损伤部位的DNA复制，使细胞得以存活，在DNA复制时导致碱基的错配、DNA链断裂，进而导致染色体重复、倒位、易位或缺失，使遗传性质发生较大变化，进而易引发广泛、长期的突变，形成新的表现型和基因型。 2影响等离子体诱变的因素 影响等离子体诱变的因素可以分为两类：一是等离子体产生的条件，包括气体气压、气流速率、组分或功率等）；二是诱变操作的条