甜瓜肌醇半乳糖苷合成酶基因CmGAS1的表达与功能分析-ricescience.PDF

园艺学报，2018 ，45 (10) ：1929 –1940. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0766；http ：//www. ahs. ac. cn 1929 甜瓜肌醇半乳糖苷合成酶基因 CmGAS1 的表达 与功能分析 1,2 1 1 3 3 3 1,* 张瑞腾 ，吕建春 ，周梦迪 ，刘静霖 ，李 仁 ，郭仰东 ，王怀松 ， 付秋实1,* 1 2 3 （中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京 100081 ； 山西农业大学园艺学院，山西太谷 030801 ； 中国农业大学园 艺学院，北京 100193 ） 摘 要：甜瓜（Cucumis melo L. ）是棉子糖系列寡糖（Raffinose Family Oligosaccharides ，RFOs ）转 运型植物。肌醇半乳糖苷合成酶（GAS ）是催化 RFOs 合成的关键酶。甜瓜 CmGAS1 基因（GenBank 登 录号为 AY077642.1 ）的cDNA 全长为 1 903 bp，开放阅读框（ORF ）为 996 bp，编码 331 个氨基酸。CmGAS1 蛋白分子量约为 38 kD，理论等电点（pI ）为4.81 。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明，CmGAS1 氨 基酸序列与黄瓜（AAO84915.1 ）亲缘关系最近，同源性为98.79%，与西瓜（Cla009222 ）同源性为97.58% 。 荧光定量结果表明，甜瓜叶片从幼叶（库）至成熟叶（源）CmGAS1 的表达显著升高，第 5 节位叶片达 到最大值。去掉 50%叶片植株与对照相比，完全展开功能叶片的 CmGAS1 表达量明显升高。应用 CmGAS1 特异性启动子构建 CmGAS1 的过表达载体，并采用农杆菌介导进行甜瓜遗传转化，获得了PCR 阳性转化 植株，转化植株完全展开功能叶片的净光合速率以及叶片中的蔗糖、棉子糖、水苏糖含量与野生型相比 均有所提高。推测 CmGAS1 在甜瓜叶片棉子糖系列寡糖合成过程中起重要作用。 关键词：甜瓜；肌醇半乳糖苷合成酶；基因表达；遗传转化 中图分类号：S 652 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2018 ）10-1929-12 Expression and Function Analysis of CmGAS1 in Melon 1,2 1 1 3 3 3 ZHANG Ruiteng ，LÜ Jianchun ，ZHOU Mengdi ，LIU Jinglin ，LI Ren ，GUO Yangdong ，WANG Huaisong1,*，and FU Qiushi1,* 1 2 （Institute of Vegetables and Flowers ，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081 ，China； College of 3 Horticulture ，Shanxi Agricultural University ，Taigu，Shanxi 030801，China；College of Horticulture，China Agricultural Universit