基于肠道易吸收纳米对比剂的大肠肿瘤MR成像研究-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 基于肠道易吸收纳米对比剂的大肠肿瘤MR成像研究 浙江大学医学院 影像医学与核医学 研究生 白维娴 导师 杨晓明 中文摘要 目的 以多功能固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLNs)为载体，负载磁共 振对比剂钆喷替酸葡甲胺(gadofinium diethylenetriaminepentaacetic acid．，Gd--DTPA) 及异硫氰酸荧光素(octadecylamine fluorescein isothiocyanate，FITC)而制备的肿瘤 易吸收的多功能磁共振(magnetic resonance，MR)纳米对比剂，通过该MR纳米对 比剂体外细胞及动物模型直肠给药，体外细胞及大肠壁吸收纳米对比剂后于sE T1wI序列MR增强显示不同细胞模型、正常肠壁及肿瘤，探讨成像机制，以建立 大肠肿瘤新型MR成像方法。 材料与方法 以硬脂酸、FITC及Gd．DTPA为原料，采用乳化一溶剂挥发法合成 Gd．FITC．SLN。首先，通过激光粒度分析仪和扫描电镜检测纳米颗粒粒径，Zeta 电位分析仪检测其表面电荷，荧光分光光度计测试其包封率，最后通过加速稳定 性试验测试纳米材料的稳定性，从而完成该材料的表征测试。其次，以人结肠癌 细胞(HT29)和小鼠结肠癌细胞(CT26)为细胞研究模型，通过CCK．8，流式细 胞术，免疫荧光结合共聚焦激光扫描显微镜，完成纳米材料的细胞毒性、细胞吸 收及亚细胞定位研究；并采用MR成像技术探索细胞水平成像机制。接着，取50 只正常C57BL小鼠随机分成两组，分别予小鼠Gd．．FITC—SLN(109／Kg体重)或蒸 馏水灌肠给药，观察实验组(Gd．．FITC—SLN)有无死亡或明显毒性反应，并于14 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 天后取结肠组织进行组织病理切片，并分析其血液学和血清生化学检查，以完成 纳米材料对小鼠体内毒理试验。然后，动物活体成像部分，通过氧化偶氮甲烷／葡 聚糖硫酸钠(azoxymethane／dextran sulfate sodium，AOM／DSS)诱导雌性C57BL 小鼠结肠肿瘤(高级别上皮内瘤变)，采用3．0．T高场强MR成像系统(GE，SIGNA HD)-与特制鼠类专用线圈，将小鼠分为(1)实验组Gd．FITC．SLN(40 mg／mL，N=4) 与(2)对照组Gd—DTPA(13．92 mg／n儿，N=4)两组，分别进行对比剂直肠灌注， 分别于灌肠前、保留灌肠后20分钟、40分钟、60分钟和80分钟动态扫描，主要 扫描序列为sE T1Ⅵ序列，基本参数如下：TR／TE，550／15 ms；四个不同的TI(500， 650，800，950 ms)便于检测T1值。最后，取正常大肠壁及病变组织进行组织细胞 学分析。 结果 该纳米对比剂平均粒径220nm，Gd—FITC—SLNs中平均Gd．DTPA负载率为 29．76土4．48％(w／w)，Gd—DTPA的包封率为55．00％。两种大肠癌细胞CT-26和HT-29 细胞在Gd—FITC—SLNs的浓度范围分别为0-20099／mL和0-60％g／mL时无明显细胞 毒性(P0．05)；同时这两种细胞对于Gd—FITC—SLNs有明显摄取且具有浓度依赖 性(P0．001)，纳米对比剂主要分布在细胞浆内。小鼠体内毒理试验中，小鼠均 没有死亡或明显的毒性反应。对于AOM／DSS诱导C57BL小鼠肿瘤模型活体成像， 对比剂保留灌肠20分钟，期间正常肠壁与肿瘤组织对于对比剂均有吸收强化，但 两者强化程度不同，肿瘤强化程度低于正常肠壁。实验组中结肠肿瘤的信噪比 (SNRs)增加了2．29倍，较对照组有显著强化(P0．001 o共聚焦荧光显微镜 也证实纳米对比剂在肿瘤中的分布有差异，肿瘤包膜下分布较肿瘤实质内多。 结论 1．负载Gd—DTPA及FITC的固体脂质体纳米粒具备肠道易吸收、Gd—DTPA负 载量大、高顺磁性以及组织学可直接检测等特点。 2．体外不同大肠癌细胞对于该纳米对比剂均有明显快速吸收，可以实现细胞水 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 平成像。 3．该纳米对比剂细胞及小鼠体内毒理实验验证了安全性，有望实现临床转化。 4．基于固体脂质体纳米粒的新型MR大肠成像方法在大肠肿瘤模型中的应用 表明该方法具