响应面法优化CTF619―D菌株液体发酵工艺研究.docxVIP

响应面法优化CTF619-D菌株液体发酵工艺 研究 ：为了提高CTF619-D发酵液中的代谢物质浓度，获 得更多有效抗菌活性成分，采用响应面法对菌株的发酵条件 进行优化。结果表明，CTF619-D菌株的最佳发酵条件为摇床 转速 119. 33 r/min.装液量 109. 75 mL、温度 26. 78 °C。 关键词：放线菌;发酵;优化;响应面分析 中图分类号：TS201. 3文献标识码：A文章编号： 0439-8114 (2014) 12-2867-04 Liquid Fermentation Process Optimization for CTF619-D by Response Surface Method KANG Jing-qinl, LV Yue-dong, TAO Lin2, WANG Yongl, LIU Yangl, ZHANG Liangl (1. Liaoning University of Science and Technology, Anshan 114051 , Liaoning , China；2.Shenyang Normal University， Shenyang 110034, China) Abstract： In order to improve the concentra/tion of metabolites in CTF619-D fermentation broth for more effective antimicrobial active ingredient the liquid fermentation conditions for CTF619-D were optimized by response surface met hod. The optimum ferme nta/tion conditions were： shaking speed of 119? 33 r/min, liquid volume of 109. 75 mL, and temperature of 26. 78 °C. The inhibition zone diameter was up to 27. 58 mm under optimized conditions? Key words : actinomycetes； fermentation； optimization； response surface analysis 放线菌是具有巨大使用价值的一类微生物，是抗生素的 主要生产菌，是新医药、新农药和生物防治活菌剂研制的源 头［1］。目前，已知的抗生素大约有80%来自于放线菌，其产 生的抗生素具有抗肿瘤、抗真菌、抗细菌、抗寄生虫等多种 活性［2］。在植物病害生物防治中，拮抗微生物主要是链霉 菌属及其相关类群［3］。据报道，淡紫灰链霉菌是一类重要 的抗生素产生菌，其产生的医用抗生素如薰衣草菌素、链 丝菌素和农用抗生素如中生菌素等都已有广泛的用途［4］。 目前，国内关于拮抗淡紫灰链霉菌鉴定的诸多研究中，除淡 紫灰链霉菌海南变种外，未见有其他淡紫灰链霉菌变种的报 道。因此，CTF619-D是一株有价值的具生物活性的生防菌株, 期待进一步开发其在瓜果蔬菜病害防治领域中的应用。本试 验以菌株CTF619-D为发酵菌种，用响应面法对菌株的发酵 条件进行优化［5］,以实现试验次数的最小化和多因素交互 作用分析，并建立变量与响应量之间的模型，预测最优的条 件和结果，从而获得该菌代谢产生有效抗菌活性成分的最优 发酵参数，为该菌株在工业上大量生产代谢物质提供一定的 实践基础和理论依据。 1材料与方法 1.1材料 1. 1. 1菌株 供试菌株为放线菌菌株CTF619-D （由辽宁 科技大学生物试验室分离、筛选并保存）；指示菌株为番茄 炭疽菌、黄瓜炭疽菌、苹果腐烂菌等植物病原菌，由辽宁科 技大学生物制药工艺室提供。 1. 1.2仪器HZQ-C型空气浴振荡器（哈尔滨市东明医疗 仪器厂）、SPX-250B-G型光照培养箱（上海博迅实业有限公 司医疗设备厂）、TGL-16C型高速离心机（无锡市瑞江分析仪 器有限公司）；ZHWY-2102型恒温培养振荡器（上海向帆仪器 有限公司）、ES-315型高压灭菌锅（杭州科晓化工仪器设备 有限公司）、T-203型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公 司）、SW-CJ-5型超净工作台（南京庚辰科学仪器公司）等。 1.2试验方法 1. 2. 1菌株的活化和发酵培养将保存的放线菌菌株 CTF619-D接种于高氏1号固体培养基上，置于28 °C生化培 养箱中培养7 d,进行活化。然后将菌种接种至装有100 mL 发酵培养基的250 mL三角瓶中，于28°C. 140 r/