碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病内皮祖细胞作用研究-口腔医学专业论文.docxVIP

重庆 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 EPCs Endothelial progenitor cells 内皮祖细胞 ECs Endothelial cells 内皮细胞 FN Fibronectin 纤维连接蛋白 BM Bone marrow 骨髓 MNC Mononuclear cell 单个核细胞 FBS Fatal bovine serum 胎牛血清 EDTA Ethylene diaminete traacetic acid 乙二胺四醋酸 Dil-acLDL Diiodo acetylated-low density lipoprotein Dil 标记的乙酰化低密度 脂蛋白 FITC-UEA-1 FITC-labeledUlexeuropaeusagglutini n-1 FITC 标记的荆豆凝集素 -1 UEA-1 Ulex europaeus agglutinin-1 荆豆凝集素-1 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光黄 NO Nitric oxide 一氧化氮 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲生理盐水 STZ Streptozocin 链脲佐菌素 bFGF Basic fibroblast growth factor 碱性成纤维细胞生长因子 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 h Hour 小时 Min Minute 分钟 MTT Metromethyl thiazolyl blue 四甲基偶氮噻唑蓝 OD Optical density 光密度值 rpm Rotation per minute 每分钟转速 g Gram 克 mL Millilitre 毫升 1 碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病内皮祖细胞 作用研究 摘要 糖尿病微血管病变已成为威胁人类健康的重要杀手。糖尿病病人 拔牙创难以愈合是拔牙术后的主要并发症。血管化困难是糖尿病难愈 性创面发生的重要原因。大量研究结果显示内皮祖细胞（endothelial progenitor cells, EPCs）在血管化中起着重要作用。EPCs 是内皮细胞的 前体细胞，不仅能直接分化为血管内皮细胞参与血管发生和修复，还 可通过分泌细胞因子改善内皮功能，促进血管新生及创面愈合。 碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）在 创伤愈合及组织再生过程中起着重要作用，多用于口腔溃疡等创面的 治疗。以往实验研究显示，bFGF 可显著改善 EPCs 的体外增殖、迁移 等功能。而 bFGF 是否对糖尿病损害的内皮祖细胞具有同样的作用， 尚未见相关研究报道。因此本实验通过对糖尿病大鼠的内皮祖细胞体 外分离培养，观察不同浓度的 bFGF 对糖尿病大鼠内皮祖细胞的作用， 为利用 bFGF 和 EPCs 治疗糖尿病难愈创面提供理论及实验依据。 本实验分为以下两个部分： 第一部分 大鼠骨髓和脾脏来源的内皮祖细胞体外分离、培养鉴定 及功能检测 2 目的：分别提取大鼠骨髓和脾脏来源的 EPCs，比较其生物学特性， 为下一步实验 EPCs 的组织来源选择提供指导。从大鼠骨髓和脾脏内 皮祖细胞提取，比较其生物学特性，为下一步的来源 EPCs 提供指导。 方法：采用密度梯度离心法,从健康 4 周龄 SD 大鼠，获取骨髓和 脾脏的单个核细胞，培养 7d 后，采用细胞膜红色荧光标记的乙酰化低 密度脂蛋白(DiI-ac-LDL)和绿色荧光标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-1 ) 染色贴壁细胞鉴定 EPCs，对比分析两种 EPCs 的迁移、黏附和一氧化 氮(nitric oxide，NO)分泌能力。 结果：体外分离培养得到的骨髓和脾脏来源的 EPCs 细胞形态基 本相似。绝大部分细胞吞噬 DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-1 双染为黄色。 骨髓来源的 EPCs 在细胞增殖、迁移、黏附和 NO 分泌能力方面均显著 高于脾脏来源的 EPCs。 结论：骨髓相对于脾脏，更适宜作为体外分离培养 EPCs 的组织 来源。 第二部分 碱性成纤维细胞生长因子对糖尿病大鼠内皮祖细胞增 殖、迁移及成血管作用研究 目的：观察不同浓度 bFGF 对糖尿病大鼠骨髓 EPCs 体外增殖、迁 移及成血管功能的影响，为利用 bFGF 和 EPCs 治疗糖尿病难愈创面提 供理论及实验依据。 方法：使用高糖饮食加链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)注射的方法 诱导形成Ⅱ型糖尿病大鼠模型。采用密度梯度离心法从糖尿病大鼠骨 髓 获 得 单 个 核 细 胞 ， 培 养 7d 后 收 集