建立模拟人类自然发生的NLRP3基因突变的猪细胞系的研究-发育生物学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 时光荏苒，光阴似箭，一转眼两年多的时间过去了，这也意味着我即将告 别在浙江大学的研究生学习。在这两年多的时间里，我学到了很多，成长了很 多，要感谢的入也有很多。 感谢我的研究生导师肖磊教授。本研究论文是在我的导师肖磊教授悉心指 导下完成的，也正是肖磊教授带领我走进了科研的这一片圣土。尚老师知识渊 博，治学严谨，做事认真，为人高尚。导师用他的一言一行影响着我，必将使 我终生受益．在这两年多的学习生活里，肖老师指导着我科研课题的开展，教 导我如何去思考科学问题，如何设计方案去探究科学问题，以及在我实验遇到 困难时教我如何去分析问题并解决问题。肖老师还给我们提供了一个良好的实 验、生活氛围，时常在科研之余举办一些如爬山等让我们放松的活动，从而让 我们能够在辛勤工作的同时保持身心愉悦，劳逸结合。在此，谨向我的导师肖 磊教授表示最真挚的感谢!谢谢肖老师! 感谢我的所有实验室成员：感谢孙文采和崔春老师，她们为我们创造了一 个良好的学习生活环境，同时也感谢她们对我科研及生活中的指导和帮助。感 谢林喜娟师姐和崔迪师姐对我实验上的悉心指导和帮助，让我的实验设计和操 作技能有了很大的提高。感谢鲍磊师兄、卢鹏飞师兄、陈海德师兄、李阳师兄、 何丽夏子师姐、李文玲师姐、曾晔临师姐，感谢他们在我的实验设计、实验操 作和论文撰写上对我的指导和帮助。感谢和我一直并肩作战的石磊、李文静、 高琳和林敏，正是有了你们我们才可以一起讨论，相互学习，共同进步。 感谢各位评审委员在论文评审过程中付出的心血和给予的宝贵建议。感谢 各位答辩委员会老师在毕业答辩过程中给予的悉心指导和帮助。 谨以此致谢。路漫长，唯勤勉前行。 汪进平 2016年1月 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 建立模拟人类自然发生的NLRP3基因突变的 猪细胞系的研究 摘要 脊椎动物的天然免疫系统依靠模式识别受体识别外来病原微生 物的感染，能够确保机体在第一时间发现并处理入侵的病原体， 产生免疫反应以保护机体不受侵害。NLRP3(NOD—like receptor with pyrin domain，number3)是机体最重要的NLR(NOD (nucleotide．bmdmg domain)Like Receptors)模式识别受体家族的 重要成员之一；参与对真菌、细菌和病毒等多种病原的识别和后 续的抗感染免疫反应。最近有研究发现，自然发生的NLRP3突变 (女uR262W，第262位氨基酸由R变为W)人类个体中，NLRP3炎 症小体较不发生突变的人群更为明显。在进一步的小鼠研究中发 现，模拟人类自然发生的NLRP3突变的转基因小鼠表现为抗感染 病能力增强。猪是我国最为重要的肉食和经济类家畜之一，但是 猪病的发生或爆发，及由此引发的药物滥用、病猪处理等问题， 与国民经济、环境、人类健康、乃至民生稳定都息息相关。因此 培育抗病的转基因猪一直是转基因研究中的重中之重，有着巨大 的需求。本研究利用TALENs(Transcription Activator-Like Effector Nucleases)基因定点敲除技术、同源重组技术，建立模拟人类自 万方数据 然发生的NLRP3基因突变的猪细胞系，为下一步结合体细胞核移 然发生的NLRP3基因突变的猪细胞系，为下一步结合体细胞核移 植技术建立转基因抗病猪奠定了很好的基础。 关键词：天然免疫；NLRP3；猪；转录激活子样效应因子核酸酶；基因 突变 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 英文摘要 Generating porcine cell lines with a simulated human naturally occurring NLRP3 mutation ABSTRACT Innate imlIlune system in vertebrate relies on pattern recognition of pathogenic microorganisms infection，to insure the body to find the invading pathogens in the first time，generate an immune response to protect the body from damage．NLRP3(NOD-like receptor with pyrin domain，number3)in an important member of the family of NLR(NOD (nucleotide binding domain)like Receptors)patt