甲型流感病毒感染小鼠神经元及胶质细胞的免疫生物学效应免疫学专业论文.docxVIP

汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 汕头大学医学院硕士学位论文 I I PAGE PAGE IV 中文摘要 研究目的和意义 流感病毒为分节段，有包膜负链 RNA 病毒，主要感染呼吸道上皮细胞，从而引起流感 症状。与典型的嗜神经性病毒相比，流感病毒有时在流感相关脑病病人与流感病毒感染动 物模型的大脑组织中被检测到。 神经元为终末分化细胞，是中枢神经系统的基本结构与 功能单位。病毒感染中枢神经系统可导致神经元的损伤与死亡可造成永久的神经后遗症。 然而流感病毒是否导致中枢神经系统的病理损伤仍存在争议。 因此，进一步明确流感病 毒感染神经元细胞后的病理损伤及免疫应答，探索流感病毒感染神经元的生物学特性影响, 将有助于理解 CNS 感染流感病毒后的发病机制,为预防及治疗提供实验依据。 病毒感染的胶质细胞后过度释放的促炎症细胞因子,可能是导致神经元的炎性损伤主 要原因之一，同时星形胶质细胞也是分泌神经营养因子的重要来源细胞，对神经元起到支 持和营养作用。到目前为止，流感病毒感染星形胶质细胞是否上调神经保护因子尚未见文 章报道。 因此， 探索星形胶质细胞在流感病毒感染后, 其神经营养因子类型的变化，将 有助于明确胶质细胞在流感病毒感染 CNS 时的功能和作用。 实验方法 孕鼠 18d 取胚胎，体外培养小鼠大脑皮层神经元细胞。用流感病毒 H1N1 体外感染神 经元细胞， 检测神经元细胞病变效应、细胞凋亡、细胞活性，细胞因子基因转录及蛋白 水平变化， 检测流感病毒在神经元的病毒基因的转录与复制。 新生 24h 内小鼠， 取大脑皮层培养神经胶质细胞，经温和胰酶消化结合定轨摇床振荡 的方法分离纯化星形胶质细胞。流感病毒体外感染星形胶质细胞，检测病毒感染后星形胶 质神经营养因子转录水平的变化。 实验结果及结论 1 成功分离培养皮层神经元细胞，体外培养神经元纯度经检测在 95%以上。 2 流感病毒感染神经元细胞后，神经元不发生细胞病变效应及凋亡。 3 流感病毒感染神经元细胞后可显著降低细胞的活性，ST169 感染细胞后 6-24h 内细 胞活性变化不大，PR8 株感染 6h 到 24h 后，神经元的活性慢慢恢复。 4 流感病毒感染神经元细胞后，病毒基因的转录在感染 6h 与 24h 内表达上调;，病毒 vRNA 的复制受到影响，在感染后 6-24h 内几乎没发生变化。 5 流感病毒感染神经元可诱导神经元的细胞因子（IL-6 ,IL-10，IFN-β, TGF-β, TNF-alpha，CXCL10) 的 mRNA 水平上调。 6 病毒感染神经元上清中的细胞因子（IL-6 和 TNF-alpha）分泌量极低。 7 流感病毒感染神经元后，神经元细胞中 NF-kB 蛋白未见被激活。 8 星形胶质细胞被流感病毒感染后明显上调 GDNF 转录水平表达，营养因子 NGF、BDNF、 NT-3 转录水平未见改变。 关键词：神经元； 星形胶质细胞； 流感病毒； 细胞因子； 天然免疫反应 III III PAGE PAGE IV Abstract Background and aims Influenza virus is an enveloped multiple-segment negative-stranded RNA virus which mainly infect respiratory tract. Unlike stereotypic neurotropic viruses, influenza A viruses sometimes can be detected in brain tissues of patients and animal models. Neuron is postmitotic and nonrenewable cell which is structural and functional unit of central nervous system. Neurotropic influenza viruses infect CNS which can induce neurons apoptosis or indirect neuronal injury through microgliosis or astrogliosis. But it is still controversy on influenza encephalopathy and encephalitis. The current study was aim to determine the potential role of neuron in innate immune response to i