利用基因工程菌HC01固定化细胞转化生产D-对羟基苯甘氨酸.PDF

微生物学通报 MAY 20, 2010, 37(5): 631636 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 利用基因工程菌HC01 固定化细胞转化生产 D-对羟基苯甘氨酸 * 钮利喜 南晶 石亚伟 (山西大学生物技术研究所 教育部化学生物学与分子工程重点实验室 山西 太原 030006) 摘 要: 对一菌两酶工程菌HC01 转化底物DL-对羟基苯海因(DL-HPH)的最适条件及其细胞固定 化进行了研究, HC01 游离细胞转化DL-HPH 的最适条件为40°C 、pH 7.5 。通过对固定化细胞酶活 力测定, 确定细胞固定化的最优条件为海藻酸钠浓度2.5% 、细胞浓度0.029 g/mL 、钙离子浓度3% 。 固定化HC01 的热稳定性比游离细胞高 5°C, 二价金属离子 Mn2+ 、Mg2+ 、Cu2+ 、Co2+和 Ni2+在浓 度为 0.1 mmol/L 时对固定化细胞中D-海因酶(HYD)和N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶(CAB) 两酶 的活力无显著影响, Mn2+和Mg2+可分别使游离细胞中CAB 活力提高至原来的2.1 和2.7 倍。在氮 气保护下, 当初始pH 为9.0 、转化温度为40°C 、转速为80 r/min, 利用固定化HC01 转化30 g/L 的DL-HPH 时, 36 h 后转化率可达97%左右, 产物D-HPG 经纯化后光学纯度达到99.7%, 得率可 达85%。 关键词: D-氨基酸, 基因工程菌, 固定化, 海藻酸钙 Bioconversion of D-HPG Using Immobilized Genetic Engineered Strain HC01 NIU Li-Xi* NAN Jing SHI Ya-Wei (Institute of Biotechnology , Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering, Ministry of Education , Shanxi University, Taiyuan, Shanxi 030006, China) Abstract: The cells of engineered strain HC01 were immobilized in the form of Ca2+-alginate beads. The conditions for immobilization were investigated. The optimal gel concentration and cell concentra- tion were found to be 2.5% and 0.029 g/mL in the presence of 3% CaCl2 . The thermo-stability of im- mobilized cells was 5°C higher than t