尖孢镰刀菌高产纤维素酶菌株的筛选鉴定及发酵条件优化-生物工程专业论文.docxVIP

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原创性声明 本人声明:所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文 已经注明引用的内容外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得内蒙古 大学及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 盈参钐 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日 期: 日 在学期间研究成果使用承诺书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学11i7:论文的规定,即:内蒙古大学有权将学位论文 的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘,允许编入有关数据库 进行检索,也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产 权,作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究 成果,须征得内蒙古大学就读期间导师的同意;若用于发表论文,版权单位必须署名为内蒙占人学方 可投稿或公开发表。 学位论文作者签名: 五够 乡 指导教师签名: 日 期: r}q|| £ £ 日 尖孢镰刀菌高产纤维素酶菌株的 尖孢镰刀菌高产纤维素酶菌株的 筛选鉴定及发酵条件优化 摘要 本文对实验室保藏的121株尖孢镰刀菌(形态学鉴定)进行了产纤维素酶的 研究, 通过初筛复筛得到了了5株纤维素酶的高产菌株。对所得菌株进行了 ITS序列鉴定和粗酶液酶学性质分析,并进行了发酵产酶条件的优化。 通过刚果红染色观察水解圈的方法从121株尖孢镰刀菌(形态学鉴定)中初 步筛选出20株酶活较高的菌株。从初筛得到的20株菌种通过粗酶液酶活测定和 酶活力计算,筛选出纤维素酶活力最高的5株菌,其中H57.1酶活力达到 16.41U/ml。 对筛选出的5株菌进行ITSrDNA序列测定。测序结果利用www.NCBI.nlm. nih.gov中BALST软件,与Genbank数据库进行序列比对分析,结果显示5株菌 均与尖孢镰刀菌(Fusarium Oxysporum Schlech)亲缘关系最近,相似性达99%。 对菌株H57.1的粗酶液酶学性质进行了分析。以CMC.Na为底物,其最适反 应条件为PH=5.3,62。C。该酶具有良好的pH稳定性和温度稳定性,尤其作为真 菌对强碱环境的耐受能力,一定程度上能弥补真菌纤维素酶耐碱性差和细菌纤 维素酶酶活低的不足。 对菌株57一l最适产酶发酵条件进行了优化。以麸皮48.09/L、蛋白胨14.09/L、 磷酸二氢钠2.09/L、氯化铵3.99/L、氯化钠2.09/L、pH7.O配制发酵培养基,取3mL 种龄48h的种子液接种发酵培养基,温度28。C、摇床转速150r/min振荡培养85h, 种龄48h的种子液接种发酵培养基,温度28。C、摇床转速150r/min振荡培养85h, 最终酶活力达到23.19U/ml,比初始酶活力提高了41.3%。 关键词:尖孢镰刀菌;纤维素酶;CMC.Na;ITSrDNA n SCREENING SCREENING AND IDENTIFICATION OF CELLULASE.PRODUCING STRAIN OF FUSARIUM OXYSPORUM,OPTIMIZATION OF FERMENTATION CONDITIONS FOR PRODUCING CELLULASE Abstract This research was designed to study cellulase production of 1 2 1 strains of Fusarium Oxysporum Schl.based on morphological characters which was stored by our aboratory.Through primary screening and secondary screening,Five strains with higher cellulase were screened out.The ITS rDNA sequence of the five strains were identified,the characterization of fermentation broth of the best strain was determined and Fermentation Conditions for Producing cellulase was optimized. 20 strains were screened out by measuring the hydrolysis cercle.After cellulase activity

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