间接ELISA检测新型鸭瘟抗体和IFA检测新型鸭瘟病毒的研究-预防兽医学专业论文.docxVIP

关子学搜论文原刨性鞠使嗣授投豹声鞠零A濒娶蹙麴喾键埝文，甍凌尊搏攒蜉下，独立进纷科攀研 关子学搜论文原刨性鞠使嗣授投豹声鞠 零A濒娶蹙麴喾键埝文，甍凌尊搏攒蜉下，独立进纷科攀研 ；徽取褥瓣成莱。辩簌谂文研究辩褥洽警捺譬、帮赣衮散穗黧婺 j黻黝个人绒熊体，均礁文中瞩确说明。零声明的法律赞侄出本 、熬燕。 本人竞垒了解妇畚裳攮走学崧美傺爨黎傻耀攀嫂论文姻觌 主，簿嚣攀蔽绦露褰攘婺求觏国家餐美酃瓣域撬鞠送交论文缓璇 器鞠姑子舨，允许论文被蜜蠲稻锵瓣。本人攫粳出裘农炊丈学麓 冀将零擎霞谂文戆垒嫠或韶努巍骞壤入露美数攘瘴避纷竣索，霹 基采翊影鞠、编印或箕饿复制学段像襻论文裙汇缝本攀健谂交。 黎密莞交鑫簿密嚣痰遴毒簸糕定。 论文霉毒签懿：麴鬓 警搏煞褒：司翁辞 山东农妲大学硕士学位论文闻接ELISA梭测新型鸭癜抗体和IFA检测新型鸭瘟病毒的研究 山东农妲大学硕士学位论文 闻接ELISA梭测新型鸭癜抗体和IFA检测新型鸭瘟病毒的研究 攘要“ ‘本研究对新擞鸭瘟病毒(暂定名)的撼纯方法，检测新型鸭瘟瘸毒抗 体的伺接ELISA方法，对病簿抗原进行定位的间接免疫荧光法，不同继代 代次豹鹤珏尿囊渡鼹鹃豹致痰力与撬覆捡斑搴豹关系遴孬7磷究，确定了 瘸毒抗原的最佳搬纯方法，间接ELISA的最佳反应条件和其敏感性、特异 性和熏复性，对瘸毒抗原进彳予了定位，确患了不同代次的病毒对鸭的致病 力麓抗原检出率熬关系。绩巢表骥：以50％稳彝疫(N糨)2S04法或10％ PEG6000沉淀法糖提，再经Sephadex(}-200层析缝纯，W获褥纯度较麓的 瘸獭摅原；间接ELISA方法檎溅新型鸭瘟墩清抗体有很i断韵敏感性，特异 性翻鬟复健：阋攘氮痰荧光法涯爽病毒雷赣潋鹦的野、滕最煮，其次为照 滚、越、舞整努褥餐；蕤蓑魏鼹浚数壤多，该瘸毒黠鹎瓣致病秀露显减弱， 20代后基本不齄使鸭发耘饿熊强鸭体癍猢瓢增殖i对瘸霉检出率没有影 响。 t 本磺究共分瓣部分； 。： 第·都分=|静}疆鸭瘫瘸獭盼撼纯，． 。。 从自然发痕毵霞恩奄熟型黻德瘸捌中分离到一株瘸毒i揍种12日龄 簧鹣凝捷找，皎熊寮荤蔓爨毒黪癸l擞繇窭乒獭肄毒炎登糕变魏攀艇嚣囊滚， 分剐馘50％泡黪壤剁嚣《)2零铷i魏，纂嘲籀静度掰暖4薨!S{X法一嚣％PEG。|6000 沉淀法t∞％瓒瀚簸∞。虢撼活糖褥鹦题鬃瓣灌审髓病卷j、爵经Sephadex G-200屡撰，缝傀程摄癣毒捞蕊。势燕麟攀怒流速。络莱漤赡班鳕鳐魄鹈 囊CNH也s04法稀]0％PF麟000沉淀法粗髓瘸毒簸栗稿瀵,SephadexG．200 层柝时控制流速海0．5ml／min时救果较好。1炎予0．Sml／min很滩将瘸辫妁杂 蛋翻分开，小予0．5ml／min时蜂域变宽、拖飓，同样影喻分离效果。 第二部分：溺接ELISA稔溪蘩鬟鹩症纛清抗俸； 将纯化病毒作为包被抗原，包被浓度1．17谴7孔，包被后3TClh转入4 。C过夜包被效果较好：封闭麟以37℃lh、瓶滴加入后以37℃1h、酶标抗体 热入嚣鞋37℃l纛爱痤，效鬃羧理想，酶弦浚霹王终浓波0,25ug／ml。经撞 帮福英：间接ELISA检涮新受鹏艇病毒抗体和IFA棱涮蕲型鸭癜璃舞的研究测30份阴性血清，袭明阴、阳性斑清的临界德为O．20，受梭血清赢于此傻 帮福英：间接ELISA检涮新受鹏艇病毒抗体和IFA棱涮蕲型鸭癜璃舞的研究 测30份阴性血清，袭明阴、阳性斑清的临界德为O．20，受梭血清赢于此傻 楚秀鞠往：羧测酸毒雉鹎蛊涛摭镶，狳发瘸器l一3天凑惫羧死亡耆隶羧溅 抗体外，其余检测绪果均为阳性，捡出率80％；免疫雏鸭可龛部检出阳性。 经对不同标准阳性呶清和自制阳性m清的检测，证明新型鸭瘟阳性血清与 鸭痘鞭瞧盘涛毒部分糖关性，毒其宅{#摆关投瓣牲盘渣不褰在交叉反戏。 对6份血清在不嗣时闽相同条件下检铡3次，判定结果完念相同。以上研 究表明该方法具有徽高的敏感性、特异性和重复性。 第三部分；闻接受疫荧必法瓣病毒抗原进符定位 势剐用NDPV、DPV对lO麓龄稻so弱靛鹤攻毒，入溅复裁病铡，予 攻毒精不同时间采集病料，作冰冻切片和组织压印片，IFA法检测瘸鸯抗 原。续聚衰明NDPV对雏鸭致瘸凳较强，DPV莠使戚鹦教癍；雏鸭攻凑 NDPV惹爱佳采弹辩润魏袭霉嚣72h；滚毒DPV霜毒缝采榉荧蜜。强瓣举 同病料检测，表弱NDPV帮瑚蝴禳零瓣氯种二攀溺丑静的麟俸海蹭獾部位 基本槌圊，即肝、脾含量最高，其次为斑液，褥者为腋、鼻靛分泌物。备 莲器鹣溶冻鬟冀羧懑搴饔显毒予鬟零篾； 第蹰部分：不同代次豹病毒液对鸭的致病力每抗原检出幕驹关系 分嚣Ⅱ用第2、5、“1。。10．15、2“。叠$，德鸭魅壤瀵滚攻毒1皤龄绻鲞鸭，攻 毒量0．5nfl／R，每糕孓爨。缝爨裘甓叠髓罄越健凌鼗攀多，。该寰鼙