建立xMAP液态芯片和荧光定量PCR法检测福州地区急性呼吸道感染儿童呼吸道病毒的分析-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 【摘要】 目的 应用 luminex xMAP 技术建立一种液态芯片，能够快速、准确检测多种呼吸道 病毒 , 包 括 人 冠 状 病 毒 -NL63 （ HCoV-NL63 ）、 -HKU1 （ HCoV-HKU1 ）、 -OC43 （HCoV-OC43）、-229E（HCoV-229E），人偏肺病毒(HMPV) 和人博卡病毒(HBoV)。 建立荧光定量 PCR 技术检测 InfVA,InfV B,RSV,PIV1,PIV2,PIV3,Adenovirus, HCoV-NL63、-HKU1、-OC43、-229E，HMPV 和 HBoV。应用建立好的以上方法检 测福州地区急性呼吸道感染儿童呼吸道病毒病原并进行临床分析。 方法 应用 DNAMAN7 软件设计对病毒保守区的引物和探针，建立针对以上病毒的液 态芯片和 FQ-PCR 法。收集 2011 年 12 月～2012 年 9 月福建省立医院住院部 儿科病房急性呼吸道感染患儿的咽拭子标本，共计 299 例。利用建立好的液 态芯片和 FQ-PCR 检测收集到的标本。 结果 1、 建立的液态芯片检测灵敏度除 GAPDH 和 HCoV-OC43 为 103copies/μl ～ 108copies /μl 外，其它病毒如 HCoV-NL63、HCoV-229E、HCoV-HKU1、HMPV 和 HBoV 均在 104copies/μl ～ 108copies /μl 之间。液态芯片特异性试验 中 7 种荧光微球能够检测出相应靶病毒，不与其它病毒发生交叉反应，特异 性好。其批内批间重复性实验结果显示中位荧光强度值变异系数分别在 0.52%～1.39%和 1.92%～3.44%范围内。 2、建立的 InfV A、InfV B、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adenovirus、HCoV-NL63、 HCoV-HKU1、HCoV-OC43、 HCoV-229E、 HMPV 和 HBoV 的荧光定量 PCR 法有良 好的敏感性与特异性。 3、 2011 年 12 月～2012 年 9 月福州地区收集的 299 例急性呼吸道感染患 儿中，HCoV-NL63 、HCoV-HKU1、HCoV-OC43、HCoV-229E、HMPV 与 HBoV 分别 检出 10 例（3.3%）、2 例（0.7%）、21 例（7.0%）、3 例（1.0%）、18 例（6.0%）、 26 例（8.7%）。InfV A、InfV B、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adeno 分别检出 5 例（1.7%）、7 例（2.3%）、54 例（18.1%）、1 例（0.3%）、1 例（0.3%）、 12（4.0%）、42（14.0%）。ARTI 患儿病毒总检出率为 58.9%。病毒检测阳性患 儿中 11.9%(21/176)存在 2-4 种病毒的混合感染。HCoV-OC43、-229E、-NL63 感 染高峰在春季，HCoV-HKU1、HMPV,HBoV 感染高峰在冬春季，主要侵犯≤1 岁 儿童。 结论 1、本研究成功建立了能并行检测冠状病毒 NL63、-HKU1 、-OC43、-229E，HMPV 和 HBoV 的液态芯片法。 2、2011 年 11 月～2012 年 9 月福州地区急性呼吸道感染患儿中，存在 InfV A、InfV B、RSV、PIV1、PIV2、PIV3、Adenovirus、HCoV-NL63、HCoV -HKU1 、 HCoV -OC43、HCoV -229E、HMPV 和 HBoV 的感染。 3、呼吸道病毒的检测有助于急性呼吸道感染病毒病原学早期诊断，有利于指 导临床合理用药，达到早治疗、早康复的目的。 【关键词】 液态芯片 急性呼吸道感染 人冠状病毒 人博卡病毒 人偏肺病毒 荧光定量 PCR Establishment of an xMAP fluid bead-based suspension array and FQ-PCR for detection of respiratory viruses in children with acute respiratory tract infections in Fuzhou 【Abstract】 Objective The objective of the study was to develop a fluid bead-based suspension array by use of luminex xMAP technology for rapid and accurate detection of mult iple respiratory viruses, i