角膜胶原交联对小鼠真菌性角膜炎的治疗作用-眼科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 摘 要 角膜胶原交联对小鼠真菌性角膜炎的治疗作用 研究生：王素娟 导 师：王丽娅 郑州大学人民医院 河南省眼科研究所河南省立眼科医院 河南 郑州 450003 摘 要 目的 观察核黄素紫外光介导的角膜胶原交联（corneal collagen cross-linking， CXL）技术对小鼠真菌性角膜炎的治疗效果并探讨其作用机制。 材料与方法 随机选取角膜正常、8-10 周龄的 SPF 级雄性 C57BL/6J 小鼠 96 只，体重 27-30g，在小鼠左眼角膜中央用无菌手术刀片做十字划痕，深度达基质层，再用 无菌注射针头在十字划痕上涂抹腐皮镰刀菌，建立腐皮镰刀菌型真菌性角膜炎 模型，右侧眼为正常眼。模型成功后 24h，按照随机数字表法将实验小鼠分为 CXL 治疗组与非治疗组，每组各 48 只，对 CXL 治疗组小鼠进行核黄素紫外光 角膜胶原交联治疗，非治疗组小鼠不做任何处理。在模型成功 24h（交联前 0h)、 36h、48h、72h、96h 和 120h 对两组小鼠进行裂隙灯显微镜检查和眼前段数码照 相，观察小鼠角膜溃疡大小、前房积脓以及炎症反应等临床表现并进行临床评 分，评价 CXL 对小鼠真菌性角膜炎的治疗效果；于 CXL 治疗后 12h（模型 36h) 取 CXL 治疗组与非治疗组小鼠角膜组织各 6 只，角膜剪碎、研磨，在土豆汤葡 萄糖琼脂培养基中培养，观察真菌生长活力并进行真菌菌落记数，评价 CXL 对 真菌生长活力的影响；在 24h、36h、48h、72h、96h 和 120h 时间点分别取 CXL 治疗组与非治疗组小鼠角膜组织各 6 只，进行基质金属蛋白酶 9（matrix metalloproteinases，MMP-9）的活性测定，观察 CXL 治疗对 MMP-9 活性的影响。 I 结果 1、小鼠腐皮镰刀菌型真菌性角膜炎模型建立成功后 24h，在裂隙灯显微镜 下可见角膜灰白色浸润灶，部分可出现前房积脓、卫星灶，在激光扫描共聚焦 显微镜下可见角膜病灶及其周围大量真菌菌丝和炎症细胞浸润。 2、裂隙灯显微镜观察到 CXL 治疗组较非治疗组角膜溃疡病灶明显缩小， 溃疡较浅，病程缩短，角膜穿孔率低，各个时间点临床评分明显低于非治疗组， 差异有统计学意义（P 0.05）。 3、角膜组织真菌培养，培养 36h 时培养基中开始有真菌菌落生长，培养 48h 时对 CXL 治疗组与非治疗组进行真菌菌落计数，两组真菌菌落计数无明显统计 学差异 （P 0.05）。 4、酶活性测定发现 CXL 治疗组角膜组织中 MMP-9 活性明显低于非治疗组， 差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 1、核黄素紫外光角膜胶原交联在治疗腐皮镰刀菌型真菌性角膜炎方面效果 显著，CXL 治疗后角膜溃疡病灶缩小，临床评分降低，减轻了真菌对组织的破 坏，但对腐皮镰刀菌的生长无明显抑制作用。 2、核黄素紫外光介导的角膜胶原交联可以降低真菌性角膜炎过程中 MMP-9 的表达活性，这可能是 CXL 治疗后角膜组织破坏减轻的物质基础。 关键词：角膜胶原交联；真菌性角膜炎；C57BL/6J 鼠；MMP-9 II Abstract Abstract Treatment of fungal keratitis by corneal cross-linking in mice Postgraduate Wang Su-juan Tutor Wang Li-ya Department of Ophthalmology The People’s Hospital of Zhengzhou University Henan Eye Hospital Henan Eye Institute Zhengzhou, China