姜黄素对小鼠阿霉素肾病作用的实验研究-肾内科专业论文.docxVIP

J蔷》华中科技大学同济医学院 J蔷》华中科技大学同济医学院 2002级博士毕业论史 姜黄素对小鼠阿霉素肾病作用的实验研究 中文摘要 阿霉素(adriamycin，ADR)诱导的肾病被认为与人类的微小病变及局灶阶段 性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis，FSGS)及其相似。尽管阿霉素 诱导的大鼠肾病模型已广泛应用于实验研究，但此模型在小鼠中成功的建立国内 还没有见到报道。国外曾有报道阿霉素肾病小鼠有其独特的优越性，如成模时间 快、经济易操作、更有益于遗传学和免疫学研究等。ADR诱导的肾脏病理改变的 机制目前还不清楚，虽然与对上皮细胞的直接毒性效应有关，但不可能是因为阿 霉素毒性的慢性累积效应造成的进展性肾小球和肾间质的损伤，因为阿霉素能够 迅速的被血液和肾脏清除掉。本课题拟建立小鼠阿霉素肾病模型，进一步探讨其 发病机制。 NF．K B是一种介导细胞内信号转导的重要因子，一般情况下NF．K B是以 P50．P65 I B结合成三聚体以无活性的形式存在于细胞浆中。目前已发现它调节 着t00多种靶基因的表达，如细胞因子、化学趋化因子、生长因子、粘附分子等，多 数均参与宿主的免疫和炎症反应。这些因子对于免疫细胞的趋化、浸润、活化、 增生、分泌等有直接的调节作用。1 B是细胞内NF．x B的主要抑制因子，细胞内 I B的水平、I B受信号刺激后能否正常磷酸化进而降解对NF—K B活化起关键 作用。在许多实验性肾小球肾炎如抗肾小球基底膜肾炎、系膜增殖性肾小球肾炎、 免疫复合物性肾小球肾炎等模型中均可见肾小球或肾皮质中NF-x B活性的增加。 但NF．K B活化在阿霉素肾病中的作用研究报道的较少。 姜黄素作为一个传统的药物已被广泛用于临床治疗，如类风湿性关节炎、肠 炎性疾病、动脉硬化、皮肤损伤、肝胆疾病等。目前姜黄素在治疗‘肾脏疾病中已 弓{起广泛的重视。姜黄素能降低肾缺血再灌注和单侧输尿管阻塞模型大鼠血肌酐 水平。抑制肾组织中RANTES、MCP一1，和同种移植物炎症|夭I-T-mRNA表达，从而减 轻肾小管损伤及其间质炎症反应，此外，姜黄素能延长皮肤移植物的存活时间，还可 对华中科技大学同济医学院 对华中科技大学同济医学院 2002级博士毕业论文 减少阿霉素肾病尿液中N一乙酰一B—D．氨基葡萄糖酸苷酶、纤维连接蛋白、氨基葡糖 多聚糖的含量，提示姜黄素具有潜在的免疫抑制及肾脏保护作用。 本课题通过成功建立小鼠阿霉素肾病模型及体外培养细胞，动态观察了NF． B／I B信号通路及受其调控的某些因子(本实验只研究TMCP一1)及免疫炎性细 胞的变化在阿霉素肾病发病中的作用以及姜黄素对阿霉素肾病的作用及机制，旨 在进一步为姜黄素在肾脏疾病领域中的应用提供有力的实验依据。 第一部分小鼠阿霉素肾病的实验研究 目的为了更好的研究阿霉素肾病的发病机理，寻求建立一个稳定性好、个体 差异小与人类肾病极其相似的动物模型。方法给予Ba|b／c小鼠尾静脉注射阿霉素 10．5mg／kg后观察0、1、2、4、6、8周体重、尿蛋白、血清白蛋白、血甘油三酯、 胆固醇、肾功能、外周血淋巴细胞及病理学改变以及肾组织中NF-K B活化、MCP．1 的表达以及免疫炎性细胞的浸润变化情况。结果小鼠慢性进展性肾病模型复制成 功。尿蛋白、血甘油三酯、胆固醇等随着实验的进程明显增高，而妞清白蛋白、 肾功能进行性下降，肾脏病理由微小病变型发展至肾小球硬化型，NF．It．B异常活 化、MCP．1表达增多，CD4+、CD8+T细胞逐渐增多、巨噬细胞逐渐减少。结论本 实验成功的建立了～个稳定性好、重复性好、个体差异小且与人类慢性肾病极其 相似的小鼠阿霉素肾病模型，NF—K B异常活化可能在阿霉紊肾病发病机制中起着 重要的作用。 关键词Balb／cd、鼠：阿霉素肾病；NF．K B；免疫细胞 四华中科技大学同济医学院 四华中科技大学同济医学院 2002缀僻士毕业论文 第二部分姜黄素对小鼠阿霉素肾病作用的实验研究 实验一 姜黄素调节小鼠免疫功能的实验研究 目的探讨姜黄素对小鼠免疫功能的调节作用及其可能机制。方法通过噻唑 蓝(MTT)比色法研究姜黄素对小鼠脾淋巴细胞增殖及小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬 功能的影响；用WesternBlot法捡测脾淋巴细胞胞核NF-K B p65蛋白的表达。结 果姜黄素能够增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能；小剂量姜黄素能够增加小鼠脾 淋巴细胞的增殖；大剂量姜黄素能够抑制小鼠脾