姜黄素酯前体化合物靶向诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究-外科学(泌外)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 姜黄素酯前体化合物靶向诱导膀胱癌 T24 细胞凋亡的实验研究 专业：泌尿外科 研究生：肖峰 导师：石家齐 教授 【摘要】 目的 探讨姜黄素引入酯键增韧基团成为姜黄素前体化合物后靶向 诱导膀胱癌 T24 细胞凋亡，提供膀胱癌靶向治疗新的依据。 方法 分别取几种 相 同 浓 度 的 姜 黄 素 前 体 化 合 物 ： 叔 丁 氧 羰 基 - 苯 丙 氨 酸 酯 姜 黄 素 单 脂 （Boc-phenylalanine-curcumin BPC）和姜黄素对膀胱癌 T24 细胞及人主动脉平 滑肌细胞（People aortic smooth muscle cells HASMC）体外作用后，分别用 MTT 法检测比较细胞生长抑制率，流式细胞术检测比较细胞凋亡率，透视电镜观 察 细 胞 超 微 结 构 的 改 变 。 结果 5 ～ 40 μ mol · L-1BPC 及 姜 黄 素 分别 作用于膀胱癌 T24 细胞 6～24h 后均呈现出明显抑制其增殖，与浓度、时间呈正 相关，抑制率 BPC：5.31%～59.34 %(P0．05)；姜黄素：7.33%～63.59%(P0．05)； 对 HASMC 的抑制作用 BPC 则较同浓度姜黄素组显著降低（1.41%～12.34% VS 5.34%～36.59%），有统计学差异(P0．05)；流式细胞仪分析 5～40μ mol·L-1 BPC 及姜黄素作用于膀胱癌 T24 细胞 24h 后，诱导凋亡率 BPC：16.97%～47.12% （P0.05）,姜黄素:19.21%～48.92%（P0.05）；而对 HASMC 作用则较姜黄素明 显减弱，（0.94%～3.27% VS 4.69%～11.35%），有统计学差异(P0．05)。透视电 镜显示：经 BPC 作用后，T24 细胞出现典型细胞凋亡的形态学特征。结论 姜黄 素酯前体化合物 BPC 具有明显抑制膀胱癌 T24 细胞增殖，诱导其凋亡的作用，而 降低了对正常细胞的抑制作用，为进一步研究合成肿瘤的靶向治疗药物提供全新 依据。 【关键词】膀胱癌；姜黄素；前体化合物；细胞凋亡 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 BPC Boc-phenylalanine-curcumin 叔丁氧羰基（Boc）-苯丙 HASMC People aortic smooth muscle cells 氨酸酯姜黄素单酯 人主动脉平滑肌 DCC Dicyclohexylcarbodiimide 二环己基碳二亚胺 DMAP Dimethylamino pyridine 对二甲氨基吡啶 IR 1H NMR Infrared Ray Proton nuclear magnetic 红外线 核磁共振氢谱 resonance spectra PBS Phosphate Buffer Solution 磷酸缓冲液 MTT methyl thiazolyl tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5 二苯基四氮唑溴盐 DMSO dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 前 言 膀胱癌是泌尿外科常见的恶性肿瘤之一。在国外，膀胱肿瘤的发病率在男性 泌尿生殖器肿瘤中仅次于前列腺癌，居第２位；在国内则占首位，且多发与老年 人，随着人口年龄老化，发病率逐年增高，严重威胁人类健康。它的治疗主要以 手术、放疗、化疗治疗为主，将已形成的肿瘤组织切除或杀灭，但有 50～70% 的病人在一定时间内会复发，严重影响病人的预后。 且很多患者难以耐受 术后放化疗，常规的膀胱灌注化疗药物由于难以接受的强烈的全身毒性和局部 激惹[1-3]，以及现有的灌注药物的有效率仅有30．70％[4]。故寻找一种安全、有效 的治疗方法成为关键。姜黄素是植物姜黄的主要有效成分，是一类多酚类化合物， 主要具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物学功能[5],大量的体外研究已证实，姜 黄素可抑制多种肿瘤细胞的增殖，能诱导包括白血病、淋巴瘤、肺癌、前列腺癌、 胃癌、卵巢癌、乳腺癌和直肠癌等在内的多种人类肿瘤细胞株发生凋亡[6]，包括 膀胱来源的肿瘤细胞系[7]。本研究利用姜黄素具有抗肿瘤功效，在姜黄素母体基 础上加上叔丁氧羰基-苯丙氨酸基团连接成脂键，使其对膀胱癌T24细胞具有靶向 性作用，减少对正常细胞毒性作用，观察其作用效果，并与对正常组织细胞作用 进行对比，为姜黄素进一步应用于膀胱癌治疗提供依据。 图 1 姜黄 Fig 1 Curcuma 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 BPC 的合成是由贵阳医学院药学系合成，合成路线： 图 2 叔丁氧